和元生物获得发明专利授权:“一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定...

具体步骤如下:1)菌体重悬,所述重悬液含二糖类化学物质;2)碱裂解;3)中和;4)澄清;5)浓缩换液;6)分子筛层析;7)制剂换液。本发明的工艺简便,通过在菌体重悬液中添加一定浓度的二糖(如蔗糖、海藻糖等),保护大肠杆菌碱裂解过程中的超螺旋质粒,进而简化下游层析纯化工艺,并提高质粒回收率,方便快捷,适于推广应用。

...安徽工程大学张琴教授等:过表达去饱和酶基因对大肠杆菌脂肪酸...

重组表达质粒pET-28a-de1、pET-28a-de2、pET-28a-de抽提纯化,分别采用限制性内切酶EcoRI/XhoI、BamHI/XhoI、BamHI/XhoI双酶切,琼脂糖凝胶电泳结果显示,各重组表达质粒酶切后均产生两条带(图2),其中大片段均与质粒pET-28a单酶切片段长度一致,小片段分别与de1、de2、de基因的目的片段长度一致,进一...

颠覆大肠杆菌地位?创新微生物引领合成生物实验新潮流

为了生成大量的蛋白质变体以供测试,研究者经常将这些质粒导入大肠杆菌细胞内,促使其复制出感兴趣蛋白质。然而,这种方法存在一个明显的短板:那些携带质粒载体的大肠杆菌,特别是那些经过改良的实验菌株,它们的生存能力相对较弱。而且,如果没有适当的压力维持(例如抗生素),质粒会随着时间的推移逐渐丢失,这无疑给菌株的维...

一个划时代的里程碑

而mRNA的生产方式目前则更加适合大规模生产:直接将批量将病毒DNA转进质粒中,将质粒导入大肠杆菌,然后培养扩增大肠杆菌,只需要四天的培养发酵,然后就可以分解大肠杆菌,分离纯化获得DNA,然后再经过人工转录的过程,将DNA变成RNA,转录的过程只需要数小时。最后也是非常关键的技术壁垒:将mRNA加入与脂质纳米粒(LNP)结合,使其...

mRNA疫苗的发展历程与作用机制

1990年,科学家将体外转录的信使RNA(即mRNA)注射入小鼠体内,通过检测发现,其可以在小鼠体内表达活性,并产生相关蛋白且具有剂量依赖性。这种通过直接注射mRNA表达特定蛋白产生免疫反应的方法,就是mRNA疗法的雏形(相关阅读:诺奖背后:新冠中大放异彩的mRNA疫苗,与它的“免疫治疗”未来)。

mRNA疫苗超全知识汇总,看这一篇就够了!

1990年,科学家将体外转录的信使RNA即mRNA注射入小鼠体内,通过检测发现,其可以在小鼠体内表达活性,并产生相关蛋白且具有剂量依赖性(www.e993.com)2024年11月19日。这种通过直接注射mRNA表达特定蛋白产生免疫反应的方法,就是mRNA疗法的雏形。在随后的研究中发现,mRNA可以发挥类似疫苗的作用以达到治疗的目的,进入21世纪后,mRNA的合成技术、修饰技术和递...

“双非”高校,唯一单位发Nature Sustainability!|活性|催化剂|...

作者使用大肠杆菌细胞来进行研究,因为它们含有具有电催化ORR活性的膜间细胞色素c蛋白。为了提高细胞色素c的浓度和细胞外界面电子转移效率,作者采用了基因和纳米工程手段。将含有编码cytc蛋白的torY基因的质粒转入野生型(WT)细胞,以获得工程型(ET)细胞(图1)。在质粒中,强T7启动子导致ET细胞中的cytc转录和翻译率高...

中国农大团队提出高效从头合成HMO新策略,无副产物3-FL产生

首先，为了在大肠杆菌中通过从头合成途径生成2'-FL，该团队删除β-半乳糖苷酶基因lacZ生成菌株BZ，并将质粒pET-BCGIC导入菌株BZ中构建菌株BSF01，然后删除wcaJ基因构建菌株BSF02。通过一系列试验发现缺失lacZ和wcaJ基因是合成2′-FL的第一步，删除这两个基因后合成2'-FL的产量达到...

基因治疗中质粒DNA的质量控制

基因治疗是将外源基因导入人体以纠正基因缺陷的方法,通过转录和翻译实现对细胞基因表达的调控,从而合成特异性蛋白治疗相关疾病。质粒DNA(PlasmidDNA,pDNA)是自然存在于细菌中的环状DNA分子。其结构简单、具有自主复制能力、可以携带治疗基因,这些特性使其非常适合作为基因工程的载体。经基因工程改造过的pDNA,经过大量生...

超螺旋质粒DNA纯化方案 (高质量高纯度质粒的制备)

质粒DNA基因治疗药物是以质粒DNA为载体的基因治疗产品，一般选择大肠杆菌作为宿主细胞，提取出的质粒中DNA会以多种形式出现：超螺旋质粒DNA(scDNA)、开环DNA(ocDNA)、线性DNA和质粒DNA聚集体等。另外，还伴随有宿主蛋白(HCP)、宿主核酸(HCD)、RNA、内毒素等杂质。其中超螺旋质粒DNA（scDNA）是我们的...