质粒及细胞系构建定制服务

(1)亚克隆质粒构建;图4:将人源化FOXO1从pFlag-CMV4载体(a)中亚克隆至DOX诱导表达的PLVX-Tetone载体(b)(5)通过慢病毒介导的基因过表达;(b)(c)图5:(a)慢病毒包装的三质粒系统;(b)Map3k8慢病毒侵染293T细胞24h荧光图片;(c)Westernblot验证蛋白表达成功。(6)通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因...

...棘孢木霉天冬氨酸蛋白酶基因的克隆表达及其对大豆分离蛋白的水解

2重组表达载体的构建和毕赤酵母工程菌株的筛选将线性化的重组表达载体pICH/asp电转至毕赤酵母GS115后,电转菌悬液涂布在MD平板上,28℃培养72h后,从中挑取单菌落至含1%脱脂奶粉的MM培养基上,以单菌落周围产生透明水解圈为筛选标志(图4),挑取具有最大水解圈直径的转化子进行酵母基因组PCR鉴定。由图5可知,以...

丁肝治疗新思路!王文世教授团队:解码L-HDAg C端可调控病毒复制和...

随后,将相同数量的嵌合L-HDAg载体与HDV-1克隆pJC126共转染,Northernblot分析表明,表达S-HDAg的构建体对HDV复制没有显著影响。然而嵌合的L-HDAg均显著抑制HDVRNA复制(图1C);并且当嵌合L-HDAg载体与无内源性L-HDAg蛋白表达的pJC126-L(del)共转染时,也可有效地抑制HDV的复制(图1D)。因此,尽管HDV1～...

国自然撰写:经典分子机制研究(一)|位点|质粒|扩增|dna|rna|聚合酶...

因在基因B启动子扩增的引物的两端插入了NheI和HindIII酶切位点,故用NheI和HindIII限制性酶酶切后与pGL3-promoter载体上的NheI和HindIII粘性末端位点相连。2.1.3构建pGL3-Basic-基因BP(-1761/+37)质粒P(promoter)将酶切的PCR产物连入pGL3-Basic质粒,经转化细...

讲座预告 | 载体构建&逆转定量实验成功指南,包教包会我说的!

PCR&克隆产品线产品经理赵春丽qPCR产品线产品经理潘佳慧与大家交流赶紧搬好小板凳一起get行业干货吧!本期课程介绍载体构建是研究基因功能的重要手段,广泛应用于基因治疗、新药开发及优良品种繁育。载体构建方式多种多样,大家也许有以下困惑:不同方式异同点是什么?哪种更适合自己?怎样快速高效的完成研究?因此,...

分子克隆技术全攻略

分子克隆(基因克隆/DNA重组/载体构建)技术在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法(www.e993.com)2024年11月25日。常含有目的基因,用体外重组方法将它们插入克隆载体,形成重组克隆载体,通过转化与转导的方式,引入适合的寄主体内得到复制与扩增,然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体,可以得到插入DNA的许多拷贝,从而获得目的基因的扩...

PCR,酶切,质粒,载体构建,电泳:SnapGene 最全最详细使用教程

十、引物设计及模拟克隆以pEGFP-C1构建humanp53CDS过表达载体为例,通过酶切位点筛选,选择“EcoRI”和“BamHI”两种内切酶,其中需要注意的是:EcoRI在上游,BamHI在下游1.按照之前步骤,用snapgene打开p53CDS序列2.选择底部“Sequence”页面3.接下来进行引物设计:首先先选上游前20个碱基...

AAV载体构建莫发愁,金唯智Hi-Fi技术为你解忧!

AAV载体构建02ITR区域修复五金唯智rAAV的质粒构建具有以下特点先进的合成技术:可以合成高难度重复序列,高GC含量的困难序列以及含有发夹结构的ITR区域。质量可靠:酶切和测序双重检测,金唯智自主研发的ITR测序技术能够测通ITR区域,确保序列100%正确。

需要挑取更多的最终菌落克隆进行筛选鉴定,以排除非重组的载体

在本例中，用BP重组酶将从cDNA模板中克隆的可读框克隆到供体载体pDONR221，构建成功的入门载体中的可读框随后被转移克隆到目的载体pDEST-15中，该产物(目的克隆)将表达N端融合有GST的可读框蛋白。本技术可以用于指导克隆带有可替换的、不同的遗传物质(如基因组DNA、att位点，或者一个载体等)的任何目的DNA片段，如一...

我科研人员开发新型实用分子克隆技术,系统表达载体开放共享

为了方便NC克隆技术的推广使用,言普等还构建了一系列配套的系统表达载体,包括原核表达、酵母双杂交、植物过表达、植物RNAi、植物亚细胞定位、植物BiFC、植物基因编辑、植物VIGS、哺乳动物表达载体等,初步形成了一个标准化的克隆系统,为基因功能研究提供了一个便利的技术平台。该套载体向科研人员开放共享,可免费索取使用。