...棘孢木霉天冬氨酸蛋白酶基因的克隆表达及其对大豆分离蛋白的水解

2重组表达载体的构建和毕赤酵母工程菌株的筛选将线性化的重组表达载体pICH/asp电转至毕赤酵母GS115后,电转菌悬液涂布在MD平板上,28℃培养72h后,从中挑取单菌落至含1%脱脂奶粉的MM培养基上,以单菌落周围产生透明水解圈为筛选标志(图4),挑取具有最大水解圈直径的转化子进行酵母基因组PCR鉴定。由图5可知,以...

肾上腺脑白质?营养不良蛋白?慢病毒载体的构建和表达

选择ABCD1基因的H283R和P534R两个突变,首先采用方法,进行突变致病性及突变体结构稳定性预测;再利用分子克隆技术,将ABCD1基因克隆到pLEX-MCS慢病毒载体,构建野生型慢病毒载体:pLEX-ABCD1,定点诱变构建2个突变型重组载体:pLEX-ABCD1-H283R和pLEXABCD1-P534R,并与其他包装载体共转染293T细胞包装病毒。收集病毒并感...

质粒及细胞系构建定制服务

(1)诱导基因的定点突变;(单碱基突变,多碱基突变)(2)构建基因截短体质粒;图3:Stat3-fulllength和Stat3-deleteCoiled-coileddomain截短体(红框为缺失序列)示意图(1)亚克隆质粒构建;图4:将人源化FOXO1从pFlag-CMV4载体(a)中亚克隆至DOX诱导表达的PLVX-Tetone载体(b)(5)通过慢病毒介导的基因过表达;...

...植保学院韩成贵/王颖团队建立了应用于菊科作物的高效病毒载体...

在构建了ZiMMV侵染性克隆的基础上,在病毒NIb和CP蛋白的切割位点处引入外源表达基因以及蛋白酶切割位点,构建了一系列病毒表达载体。利用ZiMMV载体携带eGFP基因(图1A),绿色荧光观察和分子检测显示重组载体至少连续45天稳定地系统侵染百日菊植株,尤其ZiMMV-eGFP能侵染花器官,花瓣组织呈现明显的荧光效果,同时,重组病毒连续3...

科创前沿 | 基因工程更加精准编辑生物体

“基因工程应用基因编辑、遗传工程、重组DNA技术、分子克隆及基因克隆等,被认为是生物技术中发展速度最快、创新成果最多、应用前景最广的核心技术。”美国国家科学院院士、南方科技大学前沿生物技术研究院院长朱健康说。随着对基因工程研究不断深入,人们不仅想了解基因,还渴望改变它们,从而提高农作物的产量、改善生物体的...

同时获得T细胞与B细胞克隆空间信息,科学家提出新型空间转录组学...

通过该技术,研究人员能够在组织切片上进行空间转录组学分析,从而更加全面地了解细胞类型和基因表达的空间组织分布(www.e993.com)2024年11月26日。据悉,NatureMethods期刊还将该方法评为“2020年度方法”。然而,常规空间转录组技术虽然能够有效地保留序列的空间信息,但是由于文库构建上的限制,VDJ序列无法保留在测序文库中,因而很难获得克隆信息。

国自然撰写:经典分子机制研究(一)|位点|质粒|扩增|dna|rna|聚合酶...

2.2.1构建转录因子A真核表达载体将编码转录因子A的基因序列连入真核表达载体pcDNA3.1(+)后经酶切鉴定,出现了_bp目的条带,结果与前期设计相符,证明在真核表达载体中插入了相应的转录因子A蛋白编码序列,命名为pcDNA3.1-转录因子A。

Nature Methods | 突破蛋白质功能研究瓶颈:ORFtag高效标记与筛查...

转录激活因子筛查:将蛋白质与细菌四环素阻遏蛋白(TetR)的DNA结合域融合,使其能够招募到整合的绿色荧光蛋白(GFP)报告基因上游的TetO结合位点。通过荧光激活细胞分选(FACS)筛选出GFP表达增加的细胞,鉴定出转录激活因子。转录抑制因子筛查:使用构建的报告基因使GFP报告基因持续活性,通过FACS筛选出GFP表达减少的细胞,鉴定出转...

余方友教授:临床耐药菌研究前沿

我国耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ST22的表型和基因组分析MRSA在中国的主要流行克隆型有ST5、ST59和ST239。然而有研究表明,近年来ST22克隆已在中国出现,并在某些地区显示出取代ST59克隆型的趋势,但这些研究主要基于流行病学调查,没有深入分析毒力特征和基因组特征。

《食品科学》:四川农业大学刘书亮教授等:丝状真菌降解拟除虫菊酯...

在进行酶功能验证中最常规的方式就是克隆得到目的基因,构建表达载体以获得重组蛋白来检测酶活力,对酶的性质和功能进行研究。表达系统主要可分为原核表达系统和真核表达系统。表4列出了不同类型的异源表达系统、常用宿主细胞及表达的优缺点。原核表达系统宿主主要包括大肠杆菌和枯草芽孢杆菌,真核表达系统宿主主要包括酿酒酵...