克隆与表达干货4-Western Blot检测蛋白表达

近期小恒分享了主题干货：克隆与表达干货。其中包括：质粒构建、质粒转染、及qPCR检测基因表达~本期将继续向大家介绍如何用Westernblot实验检测目的基因的表达情况。蛋白质印迹法（Westernblot，WB）是一种利用“抗原-抗体”特异性结合来检测组织或细胞样品中特定蛋白质表达水平的常用方法。作为一种经典的实验方法，WB...

克隆水稻种子能正常结实了

该研究首次发现水稻内源基因OsWUS能够被调控诱导无融合生殖,实现克隆种子的生产,同时不影响水稻的结实率。研究团队首先构建了由拟南芥卵细胞特异性启动子驱动OsWUS的异位表达载体,并将其转入杂交水稻春优84中。通过异位表达OsWUS并结合将减数分裂转变为类似有丝分裂策略,成功获得生长发育正常的材料。此外,该株...

...棘孢木霉天冬氨酸蛋白酶基因的克隆表达及其对大豆分离蛋白的水解

2重组表达载体的构建和毕赤酵母工程菌株的筛选将线性化的重组表达载体pICH/asp电转至毕赤酵母GS115后,电转菌悬液涂布在MD平板上,28℃培养72h后,从中挑取单菌落至含1%脱脂奶粉的MM培养基上,以单菌落周围产生透明水解圈为筛选标志(图4),挑取具有最大水解圈直径的转化子进行酵母基因组PCR鉴定。由图5可知,以...

质粒及细胞系构建定制服务

(1)亚克隆质粒构建;图4:将人源化FOXO1从pFlag-CMV4载体(a)中亚克隆至DOX诱导表达的PLVX-Tetone载体(b)(5)通过慢病毒介导的基因过表达;(b)(c)图5:(a)慢病毒包装的三质粒系统;(b)Map3k8慢病毒侵染293T细胞24h荧光图片;(c)Westernblot验证蛋白表达成功。(6)通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因...

肿瘤生长总抑制率达88% 构建新型高效抗肿瘤策略

在120小时的治疗后,联合治疗组的细胞生长抑制率达到62.3%至71%,而肿瘤细胞的空载体组的细胞生长抑制率为0%。相比之下,GAU1-沉默组和H101处理组在120小时的治疗后分别显示出18.6%和31%的细胞生长抑制。此外,无论是联合治疗还是单次治疗均未显著抑制NCM460正常肠上皮细胞的生长。接下来,研究人员测试了肿瘤细胞在...

人偏肺病毒融合蛋白疫苗:研究进展

基于融合前RSVF蛋白构建体的经验,将hMPVC-85473毒株(GenBank:KM408076.1)的野生型(WT)F基因插入pcDNA3.1+载体中,进行定点诱变以产生6种不同的hMPVF蛋白(www.e993.com)2024年11月25日。经动物实验后发现,与其他5种非佐剂组蛋白疫苗相比,融合前蛋白454-HQWH-457可显著降低小鼠的肺泡内炎症和总炎症。

显著抑制癌细胞增殖和转移,西南医科大学:发现肝癌治疗新靶点

为了进一步验证circACVR2A在体内对肿瘤生长的影响,研究人员构建了稳定表达circACVR2A和其对照载体的Hep3B细胞,并根据细胞实验结果选择shRNA1沉默Hep3B细胞的circACVR2A敲低细胞。选择约5-6周龄的裸鼠BALB/c,将过表达或敲低circACVR2A及其对照组的细胞注射到小鼠右侧腋窝。细胞接种后一周,各组均出现肿瘤生长,每3天测...

国自然撰写:经典分子机制研究(一)|位点|质粒|扩增|dna|rna|聚合酶...

2.2.1构建转录因子A真核表达载体将编码转录因子A的基因序列连入真核表达载体pcDNA3.1(+)后经酶切鉴定,出现了_bp目的条带,结果与前期设计相符,证明在真核表达载体中插入了相应的转录因子A蛋白编码序列,命名为pcDNA3.1-转录因子A。

科学家提出新型空间转录组学技术,或能预测免疫细胞作用机制

通过该技术，研究人员能够在组织切片上进行空间转录组学分析，从而更加全面地了解细胞类型和基因表达的空间组织分布。据悉，NatureMethods期刊还将该方法评为“2020年度方法”。然而，常规空间转录组技术虽然能够有效地保留序列的空间信息，但是由于文库构建上的限制，VDJ序列无法保留在测序文库中，因而很难获得克隆...

神州细胞2023年年度董事会经营评述

(五)综合管理实现降本增效,合规经营构建公司治理良好生态报告期内,公司积极承担作为公众公司的社会责任及义务,构建公司治理良好生态,提高财务管理的精细化水平,建立健全和有效实施内部控制,抓好关键少数培训和监督,不断改进“三会一层”管理体系的运作制衡机制。