【小优细节君】组织磷酸化蛋白很难做?细节要注意

磷酸酶抑制剂是无法有效抑制蛋白酶的,如果总蛋白都降解了,如何去检测磷酸化呢?所以如果只加了其中一种抑制剂,很容易检测不出。如果觉得麻烦,最好是买抑制剂cocktail,效果如下:图7蛋白酶/磷酸酶抑制剂作用效果04总蛋白对照随着PMI时间增加,不仅磷酸化蛋白表达减少,总蛋白也在减少。如果只有磷酸化蛋白的结果,...

Phytomedicine | CETSA和TPP策略用于天然产物的靶点鉴定和药物...

WB-CETSA的加热温度范围是可变的,并取决于目标蛋白的热性质。因此,可能需要预实验来确定热变性的合理温度范围。(3)加热时间:大多数WB-CETSA实验均采用3min或5min加热,即短时间热脉冲即可使目标蛋白变性和沉淀。然而,对于大多数可溶性蛋白来说,不建议采用细胞过热的方法,因为这会改变细胞系统的平衡,并对细胞通透性...

【小优细节君】LC3 Western结果分析大揭秘!

上图MEF细胞在短时间的饥饿处理下(0.5h和2h),LC3-I减少,LC3-II增加;而在长时间饥饿下(4h和6h),LC3-I和LC3-II含量都减少了。如果按照之前的LC3-II/LC3-I,可能会获得4h,6h自噬更强的结论,但事实上并不是这样的,通过加入溶酶体蛋白酶抑制剂如E64d和pepstatinA处理,我们可以得出结论,在0.5h自噬是最强的...

Cancer Cell | HRS-4642联合卡非佐米,增强抗KRAS型癌症疗效

作者进行进一步的WB分析(p-ERK/ERK)(图5EFG)和蛋白酶体活力测试(图5H),认为结果确认了卡非佐米显著提高HRS-4642的体外治疗效应。图5蛋白酶体抑制剂卡非佐米在体外与HRS-4642协同作用在体内,HRS-4642对于FC1242肿瘤生长没有作用,但是和卡非佐米共用能够抑制肿瘤生长且不影响小鼠体重(图6A)。与这个结果一致,...

每日科研进展 l 2024.01.19l-167|转基因植物|水稻品种|害虫_新浪...

众所周知,PI通过阻止蛋白水解来抑制昆虫消化蛋白酶,从而导致繁殖力下降、死亡率增加以及由于缺乏必需氨基酸而导致发育期延长。丝氨酸蛋白酶抑制剂和半胱氨酸蛋白酶抑制剂是研究最多的针对害虫的植物PI。丝氨酸蛋白酶抑制剂的分子量约为39-43kDa,是丝氨酸蛋白酶的不可逆的严重抑制剂。丝氨酸蛋白酶已在双翅目、鳞翅...

艾滋病wb出现两条

艾滋病wb出现两条意味着可能存在艾滋病病毒感染,可采取抗逆转录病毒疗法、蛋白酶抑制剂、免疫调节治疗、中医药治疗等方法进行治疗(www.e993.com)2024年11月19日。艾滋病wb出现两条意味着可能存在艾滋病病毒感染,可采取抗逆转录病毒疗法、蛋白酶抑制剂、免疫调节治疗、中医药治疗等方法进行治疗。

wb印迹法艾滋病

wb印迹法艾滋病的诊断可以通过抗逆转录病毒疗法、蛋白酶抑制剂、免疫调节治疗和中医药治疗等方法进行治疗。wb印迹法艾滋病的诊断可以通过抗逆转录病毒疗法、蛋白酶抑制剂、免疫调节治疗和中医药治疗等方法进行治疗。1.抗逆转录病毒疗法抗逆转录病毒疗法通过阻断艾滋病毒感染人体后对细胞的损害过程来发挥作用。例如,依...

WB结果不理想怎么办?

参照数据库对比抗原序列和蛋白序列,选择合适一抗,确保会发生特异性反应抗原量不足或降解每条泳道上样量不低于20~30ug,使用蛋白酶抑制剂并设置阳性对照4.1.3实验操作相关原因实验操作规范对于实验结果也至关重要,且需要重复摸索。无条带出现可能是目标蛋白未从胶转移至膜上或者洗膜过度,具体分析见表...

...丙酸盐通过上调HECTD2从而靶向促进结肠癌中EHMT2蛋白酶体的降解

因此,研究者假设SP可能参与了转录修饰和蛋白酶体降解。接下来,为了验证SP是否诱导EHMT2的蛋白酶体降解,研究者在HCT116和LS174T细胞中用SP和MG132(一种蛋白酶体降解抑制剂)共同处理后进行了WB。共同处理组中,与对照相比SP处理后降低的EHMT2的水平被MG132恢复了,表明SP诱导了EHMT2的蛋白酶体降解(图2F)。此外,在...

实验做到崩溃?这 10 个技巧让做出发表级 WB 图

在样品制备过程中抑制蛋白质降解并保留翻译后修饰细胞膜的破坏释放出可以降解蛋白质的酶,尽管通过将样品保持在低温下来最小化其活性(Scopes1994)。为了限制蛋白酶活性,可以在缓冲液中加入强变性剂,如尿素。然而,这些条件可能会影响某些蛋白质的完整性;因此,裂解缓冲液常规补充蛋白酶抑制剂混合物。常见的蛋白酶抑制剂...