植物乳杆菌内源性质粒序列分析及其表达载体的构建

其中一个质粒大小在2kb左右,另外2个质粒大小在15kb以上。将小质粒(2kb左右)进行纯化回收,并命名为pLP3。对pLP3质粒分别采用限制性内切酶EcoRI、XhoI、AvrII、SpeI进行酶切分析,最终发现该质粒经EcoRI、XhoI、AvrII、SpeI酶切均获得线性化质粒,而且是唯一的线状质粒DNA条带,不存在其他大小的DNA条带(图2)。

植物表达载体转化农杆菌操作步骤

(pEmu载体:50μg"ml-1AMP+50μg"mL-1Rif/Str;pK载体:50μg"ml-1Kan+50μg"mL-1Rif/Str;pTCK载体:50μg"ml-1Kan+50μg"mL-1Rif/Str)8)随机挑取若干克隆,于含相应抗生素的LB液体培养基振荡培养;9)小量提取质粒DNA进行PCR鉴定。10)将阳性单菌落再次划线纯化。三亲交配法:参考二:...

质粒构建 | 从入门到精通

常见的感受态细胞非TOP10、DH5α、BL21莫属了,他们可是转运过程的小能手,负责质粒的克隆和表达。转化及鉴定简要步骤将连接产物加入感受态细胞,冰上放置30min、42°C热激转化或电转化,加入无抗性LB培养基,200rpm-37°C摇床摇45-60min后,涂至抗性或者其他筛选平板上,37°C培养过夜、挑取3-5...

医药行业病毒载体专题报告:CGT关键原料,关注外包生产

在AAV载体的生产中,目前主流的方法主要有三种:1、基于HEK293细胞的三质粒转染系统;2、哺乳动物稳定细胞系;3、基于夜蛾昆虫细胞(Sf9)的杆状病毒表达载体系统。1、HEK293三质粒共转染工艺的方法是研究级与临床前使用的AAV载体的主要生产方式;HEK293三质粒转染中的质粒分别有:含ITRs和目的基因的顺...

猪伪狂犬病毒gB基因在大肠杆菌中的分段表达

1.5重组表达质粒的构建将阳性质粒用EcoRI和SalI进行双酶切,回收gB各片段,连接至经同样双酶切的原核表达载体pGEX-6P-1中,构建原核重组表达质粒pGEX-6pgB-1、pGEX-6p-gB-3\pGEX-6p-gB-4和pGEX-6p-gB-5。转化至BL21感受态细胞。筛选阳性克隆,提取质粒,用EcoRI和SalI酶切鉴定,鉴定正确的阳性质粒送上海英骏生物...

医药行业mRNA产业链深度报告:第三代核酸疫苗技术颠覆性创新

LNP是主流mRNA疫苗递送载体,为目前mRNA研发企业核心壁垒(www.e993.com)2024年11月18日。由于mRNA是一个含负电荷的大分子,无法穿过由阴离子脂质构成的细胞膜,并且在体内会被先天免疫系统的细胞吞噬,或者被核酸酶降解,因此需要合适的递送载体才能实现mRNA的胞内表达。递送载体包括病毒载体和非病毒载体两种,非病毒载体具备安全性高和...

高中生物177个核心知识点汇总

前者为人们所需要的特定基因,如抗虫基因、抗病基因、人类胰岛素基因、人类干扰素基因;后者是运载体必须具备的条件之一,常见为抗生素的抗性基因(如青霉素的抗性基因)。22.目的基因的检测和表达检测:看受体细胞是否被导入标记基因(抗性基因),是否表现出标记基因的性状。

3万字!肿瘤新抗原TCR-T细胞全流程:筛选、设计到临床—上

将外源目的蛋白基因序列(外源蛋白)与特异性载体基因序列融合,导入酵母细胞。利用酵母细胞内蛋白运输机制(GPI锚定)表达目的蛋白,并将其定位于酵母细胞表面。酵母用来展示随机氨基酸表位,TCR蛋白的表达用来富集潜在的抗原表位;该系统也被称为3T系统。五、TCR克隆策略:从已知表位到特异性TCR...

医药行业细胞基因治疗CDMO深度报告:搭乘新世代药物发展浪潮

1)质粒生产一般需要2周时间。作为基因的载体,在CGT中常作为基因表达、基因编辑工具(如CRISPR-Cas系列)、病毒生产的基础平台;2)病毒生产一般需要2-3周时间。作为CGT常用的基因传递工具,它既可以作为基因治疗的最终产品,直接用于在体治疗,也可以作为中间载体将目的基因递送至体外培养的细胞。

前沿报道|余方友教授:MRSA、CRKP及结核分枝杆菌研究前沿

研究人员在该菌株中检测到两个关键耐药质粒,其中rmtB和blaKPC-2共存于同一个耐药质粒上,具备共传播的潜力。此外,还观察到关键的毒力因子iutA-iucABCD操纵子与armA耐药基因共存于p1864-1质粒上,且该质粒赋予1864菌株高铁载体含量的毒力表型。在1632菌株中,检测到两个关键的耐药质粒:p1632-1和p1632-2。p1632-1...