...集美大学刘光明教授等:拟穴青蟹精氨酸激酶的重组表达及致敏性...

将产物回收,构建分段克隆载体,转入Top10克隆宿主大量扩增后,回收质粒,将目的条带与pET-28a载体双酶切后连接,构建分段表达载体,转化BL21表达宿主。选取菌落PCR阳性克隆子进行测序。1.2重组蛋白的诱导表达及nAK、rAK、分段表达产物的纯化将测序结果正确的宿主表达菌在37℃下诱导表达后,提取超声处理的上清液和沉淀,...

《食品科学》:扬州大学孟祥忍教授等: 芝麻蛋白Ses i 3的重组表达...

构建pET-22b(+)质粒表达载体,转入BL21(DE3)感受态细胞宿主表达菌中诱导表达,对芝麻过敏原Sesi3蛋白进行重组表达和纯化,并进一步建立BALB/c过敏小鼠模型对其免疫学特性进行鉴定,以期为芝麻过敏蛋白Sesi3的量产化提供理论依据,同时也为后续芝麻致敏机理和芝麻脱敏研究奠定基础...

利用质谱技术对大肠杆菌BL21 (DE3)进行动态通量平衡分析

文中宣布，他们通过液相/气相色谱-质谱联用(Liquid/GasChromatography-MassSpectrometry,LC/GC-MS)对高密度细胞培养大肠杆菌BL21(DE3)来表达重组蛋白的补料分批发酵过程进行了废弃培养基分析，并结合之前报道的GSMM，发现三羧酸(TricarboxylicAcid,TCA)循环通量的变化与重组蛋白生产期间能量需求相关性，揭示了氨基...

...不同转录的剪切mRNA的获得及猪白细胞介素18结合蛋白的生物学功能

同时,将原核表达载体pET28a-pIL-18和pET28a-pIL-18BP转化到BL21感受态细胞中进行原核表达。纯化后的蛋白进行WB验证,证实pIL-18蛋白表达纯化成功。图3真核和原核表达的Westernblot鉴定结果4.pIL-18BP和pIL-18可以直接互作并在细胞的胞质区共定位作者用三种颜色标记不同的蛋白:pIL-18BP标记绿色,pIL-18标记...

一键领取生物药残留检测利器:Protein A、HCP、宿主DNA与内毒素...

生物药物包括单抗、重组蛋白、病毒载体等,通常由细胞表达产生,经纯化、除菌过滤、制剂工艺后获得。生产过程中可能会引入微生物污染、热原、细胞成份、工艺成份等外来杂质,影响药品的安全性和有效性,因此对杂质的鉴别、定量、定性和控制是非常重要的。一、ProteinA残留检测...

重组蛋白表达常见异常及解决方案

蛋白不表达原因很多,大部分情况下可以从下面的几个方面去调整排除(www.e993.com)2024年11月10日。通常来说原核表达中小于10kd、大于100kd的蛋白是比较难表达的;质粒构建好后一定要通过测序确认,仔细比对载体序列及插入序列,确保没有移码及突变;检查表达菌株与质粒是否配套,比如Novagen的pet系列载体是T7启动子,配套常用BL21及其衍生菌...

诺如病毒GII-4重组P蛋白疫苗,真的有开发潜力吗?Vaccines:从免疫...

研究中成功利用工程菌pET28a-inaQn-TB-P(GII.4)/BL21表达了NoV病毒的重组P蛋白。实验使用了清洁级兔进行动物实验,其伦理认证编号为IACUC-20211108-17。通过间接ELISA法测定重组P蛋白的受体结合量,制备了NoV重组P蛋白中和抗体,并通过免疫双扩散法检测抗体效价。检测结果如显示中和抗体封闭组的病毒载量明显低于非封闭组...

贝克曼库尔特 | 高通量筛选大肠杆菌重组蛋白生产用酵母营养素

随着重组DNA技术的迅猛发展,外源基因在不同宿主中的表达使得各种重组蛋白的工业生物生产成为可能。选择合适的宿主是生物工艺设计中的关键步骤之一,具体取决于:1.上游培养效率2.易于基因编辑和分子工具的可用性3.翻译后修饰的能力,如糖基化4.蛋白质(用于下游加工和作为生物制药成分等)的分泌能力...

植物中验证蛋白相互作用的Pull-down和Co-IP详细技术方案

(1)将表达GST融合蛋白(实验组)和GST(对照组)的质粒分别转入BL21菌株中;(2)分别挑取阳性单克隆于3mL含有抗生素的LB液体培养基中,37°C,200rpm,过夜培养;(3)将过夜培养的3mL菌液接入300mL(1:100)含有抗生素的LB液体培养基中,37°C,200rpm摇菌2.5-3小时,至OD600=0.8左右;...

《食品科学》:赤红球菌组氨酸激酶的融合表达和功能分析

按原文1.3.4节步骤进行双酶切,回收酶切产物,然后将回收产物进行酶连,转化到BL21(DE3)感受态细胞,筛选得到阳性克隆后进行菌落PCR,电泳结果见图2,条带大小符合预期。送生工生物工程(上海)股份有限公司测序,测序结果与预期基因序列相符,说明表达质粒pGEX-4T-2-rhks构建成功。