质粒DNA的转化实验原理、仪器试剂和操作步骤

2.DNA重组子的转化大肠杆菌DH5α本实验中的DNA重组子为人Bcl-2重组质粒。在无菌条件下按每管取200μl新鲜感受态DH5α细菌置于无菌的5ml塑料离心管中,共2管,分别加入人Bcl-2重组质粒(10ng)和消毒水(作阴性对照)各5μl,轻轻旋转以混合内容物,在冰上放置30mi...

大肠杆菌的分离和发酵培养基

如:在制备大肠杆菌DH5α感受态细胞的过程中,添加氨苄青霉素的LB培养基可作为筛选含氨苄青霉素基因质粒的大肠杆菌。伊红美蓝固体培养基(EMB):是一种主要组分为蛋白胨,乳糖。磷酸氢二钠钠,琼脂伊红,美兰的用于大肠杆菌和产气肠杆菌的分离和鉴别的培养基,也适用于大肠菌群的分离培养,为弱选择性培养基。各成分的作用为...

植物乳杆菌内源性质粒序列分析及其表达载体的构建

用SOE-PCR将Ori片段与CmR片段连接构成OCR片段,利用PshAI、NheI两个限制性内切酶将OCR片段融合在pLP3质粒载体上,将重组质粒转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑取转化子酶切验证得到正确的重组质粒,命名为D-pLP3。为确定穿梭质粒D-pLP3的宿主范围,将穿梭质粒电转化至各种乳酸菌感受态细胞内,并计算其在各种乳酸菌的转...

酵母感受态细胞的制备和保存

细胞密度可以通过使用分光光度计在OD600检测,或者使用血球计在显微镜下计数细胞。冲洗细胞,重悬于无菌水,离心,弃上清,重复此步骤两次以彻底清洗细胞。最后一次洗完,将细胞重悬于感受态细胞溶液,分装,大约每管108个细胞,每个转化反应将使用这些数量的细胞。分装好的管子放于-80°C,供以后实验使用。在所有步骤中,使...

猪伪狂犬病毒gB基因在大肠杆菌中的分段表达

1.5重组表达质粒的构建将阳性质粒用EcoRI和SalI进行双酶切,回收gB各片段,连接至经同样双酶切的原核表达载体pGEX-6P-1中,构建原核重组表达质粒pGEX-6pgB-1、pGEX-6p-gB-3\pGEX-6p-gB-4和pGEX-6p-gB-5。转化至BL21感受态细胞。筛选阳性克隆,提取质粒,用EcoRI和SalI酶切鉴定,鉴定正确的阳性质粒送上海英骏生物...

专注清洁基因组大肠杆菌生产,Scarab已开发17款产品涉足四大应用...

噬菌体和IS元件均可在生产过程中被激活,从而导致不一致的发酵结果(www.e993.com)2024年11月19日。IS元件还可以转座到质粒产物中,改变治疗剂的序列和功能,导致细菌IS元素可能在给药后进入哺乳动物基因组。通过在pDNA生产的所有步骤中使用大肠杆菌的多个缺失菌株(MDS)可消除这些问题。将这些菌株经过精确设计,即可去除所有噬菌体和转座序列。

血清4型Ⅰ群禽腺病毒Hexon、FierⅠ、FiberⅡ基因的原核表达

电泳120V、100mA,胶回收按照试剂盒要求操作。2.5载体构建与转化胶回收产物5μL,pEASYBluntE1表达载体1μL;25℃2h连接。离心管里加上50μL半解冻状态的Trans1-T1感受态细胞和连接产物,颠倒混匀,置冰上30min,42℃热激30s,置冰上2min。加250μLLB液体培养基,180rpm,37℃摇菌1h。在LB固体培养基上涂布...

水稻中一种新的蛋白酶抑制剂基因的扩增

在10μL体系中,加入lμL连接缓冲液,1μLT4DNA连接酶,lμLpBS-Tvector,2μL回收的PCB产物,用蒸馏水补足体积,冰上放置24h。4.大肠杆菌感受态细胞的制备和转化(1)感受态细胞的制备:从新活化的E·coliDH5a菌平板上挑取一单菌落,接种于3mlLB液体培养基中,37℃振荡培养12h左右,至对数生长期,1:100接种于10...