...| Phytomed揭示雷公藤红素靶向YY1和HMCES诱导DNA损伤和细胞死亡
然后进行了pull-down实验,随后进行了Westernblot检测,证明Cel-P能够成功地从细胞中拉下HMCES和HSP90蛋白(图6e)。由于WB-CETSA结果表明雷公藤红素和YY1之间存在潜在的相互作用(图5f)。rYY1的标记随着Cel-P浓度的增加呈剂量依赖性增加(图6f)。此外,当过量的雷公藤红素与固定浓度的Cel-P共孵育时,发现标记减少,表...
科学解码蛋白质相互作用:co-ip pull down技术的
其原理可分为以下几个步骤:1)免疫共沉淀:将抗体与样品中的目标蛋白质结合,形成特异性免疫复合物;2)固定免疫复合物:利用亲和材料(如蛋白A/G琼脂糖或磁珠)将免疫复合物固定在固相上;3)洗脱和分析:通过洗脱步骤去除非特异性结合物质,并对沉淀得到的蛋白质进行分析。二、co-ippulldown技术的步骤和方法1.样品...
Nature重磅综述 |关于RNA-seq,你想知道的都在这
首先,用于建库的RNA分子需要是全长转录本,但由于RNA提取、分离过程中会导致RNA断裂或实验过程中RNA降解,使得理想状态并非总能实现。这种情况在短读长RNA-seq中也会导致可控的3??端偏好,但对定位于应用长读长的RNA-seq分析全长转录组的研究者来说,即使是低水平的RNA降解,效果也会受限。因此,相关研究者需要在RNA...
分子互作|蛋白与蛋白、核酸、小分子互作检测技术介绍、应用及资料...
DNA/RNAPulldown技术是通过生物素标记的DNA或者RNA探针先和Streptavidin琼脂糖珠/磁珠结合,再与细胞裂解液进行孵育,形成磁珠-核酸探针-蛋白复合物,再对蛋白进行洗脱和鉴定。??技术特点能够真实的反映细胞内蛋白质和核酸的结合情况;实验操作简单;不需要特殊仪器。??实验步骤1、探针固定:生物素标记的DNA探针...
Pull-down实验技术交流--唯问生物Justscience
RNAPull-down,GSTPull-down,DNAPull-down;分子互作,蛋白-蛋白互作,蛋白-DNA互作,蛋白-RNA互作。有需要?找唯问!特别声明:以上内容(如有图片或视频亦包括在内)为自媒体平台“网易号”用户上传并发布,本平台仅提供信息存储服务。Notice:Thecontentabove(includingthepicturesandvideosifany)isup...
傻傻分不清?DNApull-down来啦!
二、实验流程DNApull-down实验首先针对靶标区域设计特异性DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合;纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体,经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除;最后,经洗脱液洗脱,得到目的DNA探针-蛋...
Making knee-jerk changes is not in our DNA
RightdownthemiddleTakemywordforit40-sometimesLastbutnottheleastCallitadogPullmylegEgobathToughcallRaincheckUpperreachesOfftheshouldersOffandrunningGolddustFrugalityfatigueRedflagForegoneconclusion...
核酸蛋白互作:RNA/DNA pull down,CHIRP
其中,RNA/DNApulldown是研究体外条件下RNA或DNA与蛋白互作的重要技术。该技术通过体外转录目的RNA的一部分或全长,用生物素标记转录产物,再与链霉亲和素磁珠孵育使之固定在磁珠上,用以“pulldown”互作蛋白,纯化的产物蛋白经特定抗体的western-blot实验,可验证某种蛋白与目的RNA/DNA是否有相互作用;纯化的蛋白经质...
Nature子刊Oncogene:国自然热点之“外泌体糖基化”研究该如何开展...
通过将细胞裂解物与链霉亲和素包被的磁珠一起孵育,将生物素偶联的RNA复合物拉下,进行RNApull-down测定。通过qRT-PCR评估捕获组分中circSPIRE1、GALNT3或QKI的富集。结合的蛋白质从填充的珠子上洗脱下来,并通过SDS-PAGE进行分析。捕获复合物中的蛋白质通过蛋白质印迹或银染或质谱分析进行鉴定。
【学术前沿】NCB丨韩敬东团队揭示LncRNA KCNQ1OT1序列特异靶向...
由于KCNQ1OT1本身富含的重复序列和KCNQ1OT1结合的重复序列主要都为Alu和L1,因此作者推测KCNQ1OT1与DNA的结合是通过形成triplex结构实现的,最终计算分析和triplexpull-down的实验结果表明KCNQ1OT1上的重复序列与DNA上的重复序列主要通过A-dAHoogsteen碱基配对形成triplex结构,并且随着进化年龄的降低,KCNQ1OT1结合的Alu...