你知道吗?中枢神经系统退行性疾病与某个神经元丢失有关
取出细胞爬片于室温在4%多聚甲醛中固定20min;PBS浸洗3次;在每个样品中加入50μL的TUNEL工作溶液。在37℃下孵育30~60min。用每孔200μL的PBS清洗细胞1~2次。50%甘油封片,荧光显微镜下观察拍照,计算每个视野中阳性细胞所占比例。各组PC12细胞培养24h以后,弃去细胞上清,无菌PBS洗涤3次,0.25%胰蛋白酶消化...
免疫荧光显微成像详解(上)——免疫荧光原理、步骤
一、实验步骤免疫荧光实验的主要步骤包括样片制备、固定及通透(或称为透化)、封闭、抗体孵育、封片及荧光检测等。1、样品准备对于单层生长细胞,在传代培养时,将细胞接种到预先放置有处理过(70%乙醇中浸泡)的盖玻片的培养皿中,待细胞接近长成单层后取出盖玻片即可,操作过程要小心,防止细胞脱片。对于悬浮生长细...
细胞免疫荧光(immunofluorescence)操作步骤
细胞免疫荧光(immunofluorescence)操作步骤1.细胞爬片;2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮);3.PBS漂洗5min;4.0.5%Triton穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理);5.PBS漂洗2次,每次5min;6.1%BSA封闭30min;7.加入1.细胞爬片;2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%...
敲重点-上中医等:葛根芩连汤抑制TNF-α诱导的Caco-2细胞氧化损伤...
取处于对数生长期的Caco-2细胞,接种于细胞爬片上,按“2.5”项下方法分组并给药,24h后吸弃培养板中液体,加入PBS洗涤,于4%多聚甲醛中固定,加入0.5%TritonX-100室温通透,滴加正常山羊血清,室温封闭。吸干封闭液,滴加Nrf2抗体(1∶50),放入湿盒,4℃孵育过夜。浸洗,吸干,滴...
小鼠原代海马神经元细胞的分离培养方法!
3.1.实验步骤(1)细胞爬片取3片玻璃片于24孔板中,每孔加入培养基1mL,加入细胞0.02million个/孔。置培养箱2h或过夜。(2)固定细胞爬片后,吸出培养基,用PBS洗1遍,加入4%PFA于4℃固定30min。用PBS洗3×5min/次。也可最后一次不吸出PBS,放4℃过夜。
偷偷在「培养皿」里直接做免疫荧光,结果竟然……(附免费试用)
??将细胞在200??L通透缓冲液中孵育10分钟(www.e993.com)2024年9月20日。??弃去通透缓冲液并用200μLPBS清洗细胞。??用200??L封闭缓冲液封闭30分钟。2.3.染色和封片??在封闭步骤中,准备足够的抗体稀释缓冲液来稀释一抗和二抗。??在抗体稀释缓冲液中稀释一抗(α-微管蛋白:1:200稀释)。