CRISPR干预的CHO细胞系开发方法

与SSNs相比,平台(主)细胞系(PCL或MCL)的产生是利用SSR/SSI介导的转基因整合的重要组成部分,因此在用GOI替换着陆垫(LP)之前,应该进行额外的筛选步骤,以确定具有高表达和低拷贝数的最佳克隆。这是通过测量报告蛋白的荧光强度或mAb的表达量来实现的。另一方面,与SSNs不同,由SSRs/SSRIs介导的过程不需要DNA修复途径或...

这能说吗?00 后师妹刚来就敢给师兄师姐「培训」构质粒

在质粒提取时担心质粒提取量不足,加大了菌液的使用量。按比例分了几份,取了适当的量之后就开始做提取了。师妹没想到过多的菌液会导致裂解不彻底、杂质变多,后续的纯化步骤变得困难,质粒的纯度和得率反而下降。全程目睹这一切的导师直呼让我放轻松,然而分子克隆实验涉及到核酸提取、酶切、连接、转化等诸多...

Nature与Science同时出王炸!生命科学领域又一位“天才少年”诞生...

(1)直接法/分子置换法/M(S)AD/M(S)IR等的基本原理(2)直接法/分子置换法/M(S)AD/M(S)IR等的目的(3)常用的软件介绍(4)直接法/分子置换法/M(S)AD/M(S)IR等的具体操作步骤2.电子密度修饰:(1)电子密度修饰的基本原理:(2)电子密度修饰的目的(3)电子密度修饰的常用软件介绍(4)电子...

疫苗前沿 | 禽流感病毒大流行的疫苗多样化及预防策略

第一步:DNA疫苗由一个编码抗原基因的质粒组成,质粒中含有哺乳动物启动子。第二步:它被表面修饰有树突状细胞(DC)靶向配体的包装材料所封装。第三步:将DNA递送疫苗复合物定位到树突状细胞后,编码的抗原在树突状细胞内表达,并通过主要组织相容性复合物(MHC)途径呈现加工后的抗原以激活原始T细胞。第四步:通过树突状细...

中析生物与芯宿科技共研共创自动化产品正式发布

集成自动化移液与温控水浴技术,专为合成生物学设计。它简化了质粒DNA与感受态细胞混合、热激转化及复苏培养等复杂步骤,提高转化效率与稳定性。自动化流程减少人为干预,确保实验一致性。全自动培养皿挑克隆工作站配备高清彩色CCD识别设备与精密机械臂,中析大模型算法识别软件,清晰识别目标克隆,准确挑取至目标深孔板。独...

2024年重庆邮电大学考研考试大纲:生物信息学院

3.基因表达调控基因的选择性表达是细胞特异性的基础;原核生物的基因表达调控;真核生物的基因表达调控;发育是在基因调控下进行的4.重组DNA技术简介基因工程的相关技术;基因工程主要的工具酶;基因克隆的质粒载体;重组DNA的基本步骤;基因工程的应用及其成果简介;遗传工程的风险和伦理学问题...

从餐巾纸上出现的质粒克隆技术,值得每一位科研人员好好学习!

1972年11月,在夏威夷檀香山威基基海滩的一家饭馆中,来自匹兹堡大学、华盛顿大学和德克萨斯大学的一群科学家(包括StanleyFalkow,StanleyCohen,HerbertBoyer和CharlesBrinton)在饭馆的一张餐巾纸上写下了利用新发现的EcoRI来进行质粒克隆试验的疯狂想法(图1)。1973年初,这群科学家们就开始试验验证,真正的试验比想象...

DNA体外连接的基本原理及方案

基本原理利用DNA连接酶把目的DNA片段和载体DNA连接在一起,成为一个新的重组分子。目的DNA片段被限制酶消化后其末端只可能有3种形式:(1)带有相同的粘性末端:用同一种酶或同尾酶处理可得这样的末端。由于质粒载体也必须用同样的酶消化,亦得两个相同的粘性末端,因此在连接反应中,外源目的基因片段和质粒载体...

分子克隆技术全攻略

Why?分子克隆原理分子克隆技术简单地可以理解为将DNA片段(或基因)与载体共价连接,然后引入寄主细胞,再筛选获得重组的克隆。1)获得所需的插入物(目的基因),目的基因可以是来自真核、原核生物的任何细胞类型的DNA或mRNA,也可以是实验室直接合成的。通过PCR、酶切等技术将基因组DNA或cDNA(通过mRNA体外逆转录合成cDNA...

PCR,酶切,质粒,载体构建,电泳:SnapGene 最全最详细使用教程

1.打开被插入片段的质粒图谱,选择合适的两个酶切位点,如HindIII和ApaI,如图:点击Actions→InsertFragment,点击HindIII+键盘Shift键+ApaI,点击Insert,在sourceoffragment处选择插入的目的片段来源。点击上述同样的酶,给该重组质粒命名,点击clone。十、引物设计及模拟克隆...