利用质谱技术对大肠杆菌BL21 (DE3)进行动态通量平衡分析
LC/GC-MS)对高密度细胞培养大肠杆菌BL21(DE3)来表达重组蛋白的补料分批发酵过程进行了废弃培养基分析,并结合之前报道的GSMM,发现三羧酸(TricarboxylicAcid,TCA)循环通量的变化与重组蛋白生产期间能量需求相关性,揭示了氨基酸是合成其他细胞代谢物的重要枢纽。今天...
《食品科学》:扬州大学孟祥忍教授等: 芝麻蛋白Ses i 3的重组表达...
构建pET-22b(+)质粒表达载体,转入BL21(DE3)感受态细胞宿主表达菌中诱导表达,对芝麻过敏原Sesi3蛋白进行重组表达和纯化,并进一步建立BALB/c过敏小鼠模型对其免疫学特性进行鉴定,以期为芝麻过敏蛋白Sesi3的量产化提供理论依据,同时也为后续芝麻致敏机理和芝麻脱敏研究奠定基础...
...不同转录的剪切mRNA的获得及猪白细胞介素18结合蛋白的生物学功能
WB结果表明两个目的蛋白pIL-18和pIL-18BP蛋白成功表达(图3A,C,D)。同时,将原核表达载体pET28a-pIL-18和pET28a-pIL-18BP转化到BL21感受态细胞中进行原核表达。纯化后的蛋白进行WB验证,证实pIL-18蛋白表达纯化成功。图3真核和原核表达的Westernblot鉴定结果4.pIL-18BP和pIL-18可以直接互作并在细胞的胞...
一键领取生物药残留检测利器:Protein A、HCP、宿主DNA与内毒素...
针对宿主细胞蛋白(HCP)残留检测,明星产品HCPElisa试剂盒可用于测定中国仓鼠卵巢(CHO),大肠杆菌(E.coli)和HEK293T表达体系的宿主细胞蛋白(HCP)污染,具有以下特点:??高灵敏度:检测限低至10ng/mL,确保准确捕捉残留HCP??广泛覆盖:针对CHO、E.coli、HEK293T表达体系,蛋白质覆盖率超70%,有效降低遗漏风险...
《食品科学》:吉林农业大学闵伟红教授等:谷氨酸棒状杆菌高丝氨酸...
将突变PCR产物转化至大肠杆菌BL21感受态中,经过测序验证突变成功,初筛获得酶活力提高的两个突变体A61L和G25G。测序结果表明,Asp61位点由Asp突变成赖氨酸(Lys),Gly25位点密码子由GGA突变成G。3HSD蛋白表达和纯化将诱导表达的WT、A61L和G25G依次经过前处理和镍柱纯化得到HSD纯化液,SDS-PAGE结果(图3)显示,纯化...
重组蛋白表达常见异常及解决方案
蛋白不表达原因很多,大部分情况下可以从下面的几个方面去调整排除(www.e993.com)2024年9月19日。通常来说原核表达中小于10kd、大于100kd的蛋白是比较难表达的;质粒构建好后一定要通过测序确认,仔细比对载体序列及插入序列,确保没有移码及突变;检查表达菌株与质粒是否配套,比如Novagen的pet系列载体是T7启动子,配套常用BL21及其衍生菌...
诺如病毒GII-4重组P蛋白疫苗,真的有开发潜力吗?Vaccines:从免疫...
研究中成功利用工程菌pET28a-inaQn-TB-P(GII.4)/BL21表达了NoV病毒的重组P蛋白。实验使用了清洁级兔进行动物实验,其伦理认证编号为IACUC-20211108-17。通过间接ELISA法测定重组P蛋白的受体结合量,制备了NoV重组P蛋白中和抗体,并通过免疫双扩散法检测抗体效价。检测结果如显示中和抗体封闭组的病毒载量明显低于非封闭组...
贝克曼库尔特 | 高通量筛选大肠杆菌重组蛋白生产用酵母营养素
随着重组DNA技术的迅猛发展,外源基因在不同宿主中的表达使得各种重组蛋白的工业生物生产成为可能。选择合适的宿主是生物工艺设计中的关键步骤之一,具体取决于:1.上游培养效率2.易于基因编辑和分子工具的可用性3.翻译后修饰的能力,如糖基化4.蛋白质(用于下游加工和作为生物制药成分等)的分泌能力...
《食品科学》:吉林农业大学任大勇副教授等:唾液乳杆菌膜外蛋白对...
1、重组菌E.coliBL21(DE3)的制备及EF-G纯化验证结果PCR扩增后1%琼脂糖凝胶电泳验证,ef-g基因正确克隆。pET-ef-g重组质粒导入E.coliBL21(DE3)中,卡那霉素筛选,PCR扩增1%琼脂糖凝胶电泳验证。经IPTG诱导重组E.coliBL21(DE3)菌株大量表达EF-G,EF-G蛋白分子质量约为77kDa,EF-G条带位于66.4~97.2...
微管蛋白的可溶性表达及纯化
1、将重组质粒(BL21-2??2或Rossatta-2??2)的表达菌37℃摇培过夜后,1:20扩配(约需1h15m);2、至OD600=0.5~0.7时(约1h15min~1h45min),在15-(0.5-24,0.8-12);20-(0.5-12,0.8-8);28、25-(0.8-8)进行蛋白诱导表达,具体条件根据摇床使用情况而定;...