和元生物获得发明专利授权:“一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定...

具体步骤如下:1)菌体重悬,所述重悬液含二糖类化学物质;2)碱裂解;3)中和;4)澄清;5)浓缩换液;6)分子筛层析;7)制剂换液。本发明的工艺简便,通过在菌体重悬液中添加一定浓度的二糖(如蔗糖、海藻糖等),保护大肠杆菌碱裂解过程中的超螺旋质粒,进而简化下游层析纯化工艺,并提高质粒回收率,方便快捷,适于推广应用。

如何应对抗生素耐药性?借助反向疫苗学开发的新一代疫苗,或有意想...

重组蛋白,如在大肠杆菌中产生的重组蛋白,需要从粗裂解物的混合物中提纯,这一过程昂贵且耗时。亲和标签是特定的蛋白质或多肽,可以附着在重组蛋白的N-末端或C-末端,以帮助其纯化。一种常用的方法是将重组蛋白与谷胱甘肽S转移酶(GST)或多组氨酸(His)标签融合,通过亲和层析进行纯化。在大多数革兰氏阴性细菌(如大肠杆...

“双非”高校,唯一单位发Nature Sustainability!|活性|催化剂|...

作者使用大肠杆菌细胞来进行研究,因为它们含有具有电催化ORR活性的膜间细胞色素c蛋白。为了提高细胞色素c的浓度和细胞外界面电子转移效率,作者采用了基因和纳米工程手段。将含有编码cytc蛋白的torY基因的质粒转入野生型(WT)细胞,以获得工程型(ET)细胞(图1)。在质粒中,强T7启动子导致ET细胞中的cytc转录和翻译率高...

大肠杆菌感受态细胞的几种制备方法protocol

细菌转化的方法多以Mendel和Higa(1970)的发现为基础,其基本方法是用冰预冷CaCl2或多种2价阳离子等处理细菌,使之进入感受态得以转化。用CaCl2制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞,常用于成批制备感受态细菌。本法适用于大多数大肠杆菌菌株,且迅速、重复性好。实验步骤:1、从37℃培养16～20h的新鲜平板中挑取一个...

HUST-China战队:大肠杆菌的蜕变—从致病祸首到合成生物学帮手丨...

因此,科学家们便想到了一个解决方法——将其他细菌中的双组分系统改造后移入大肠杆菌使用。这样一来,这个改造后的双组分系统只会影响到转入的目的基因的表达情况,并不会影响大肠杆菌原有的基因表达,也就几乎不会对大肠杆菌原本的生存造成影响。为了让捕获蛋白在需要的时候才进行表达,团队向大肠杆菌中导入了来自沙...

食品大肠杆菌总“超标”?真相跟你想的不一样!

英国诺丁汉大学生物科学分子中心的研究发现,通过菌体质粒序列转录翻译而来的“细菌素”(大肠杆菌素)是一种能够杀死其他细菌菌株的物质,且大肠杆菌素A能够有针对性地结合到另一个细胞蛋白(TolA)上创建一个新的“特洛伊木马”武器(大肠杆菌素A与TolA能够在一个相对较小的空间相互作用,且这种相互作用比较稳定),最...

啥是质粒?从生物武器到转基因食物都跟它有关

转基因马铃薯培育步骤:1.获取Ti质粒;2.获取目的基因;3.构建重组质粒;4.根癌农杆菌介导转化侵染薯块;5.形成愈伤组织;6.愈伤组织发芽成苗;7.试管苗结薯;8.结成的小薯种入大田无性繁殖;9.形成具有目的性状的马铃薯。(作者制图)争议与前景...

生物质粒的规模化发酵生产

质粒DNA通常是在上游生物工艺中由大肠杆菌在发酵系统中生产,一般支持病毒载体和mRNA疫苗制造的质粒生产规模都在几十升至上百升,进行高密度发酵,对发酵生产设备要求较高。大肠杆菌发酵密度高,需氧量大,对发酵培养系统的溶氧和传质能力提出了更高的系统性要求,包括关联重要配置搅拌能力、通气能力、系统自控能力等都要求颇...

专注清洁基因组大肠杆菌生产,Scarab已开发17款产品涉足四大应用...

Scarab通过删除超过15%的K-12基因组,对大肠杆菌进行生物工程改造。使用合成生物学方法,进行精确的删除,包括消除不必要的基因、重组和可移动的DNA以及隐性的有毒基因,优化大肠杆菌菌株的生产,提供遗传稳定性更强、代谢效率更优的大肠杆菌。与传统的常用大肠杆菌相比,清洁基因组大肠杆菌菌株在实验室克隆,质粒DNA产生和重...

照着文献里的方法做实验,竟然失败了

在酶切方式的选择上,除了传统的「柱下酶切(Off-columncleavage)」(将目的蛋白从填料上洗脱下来,再加入酶进行酶切)外,还提供了一种更加简便的酶切形式——柱上酶切(On-columncleavage)。采用柱上酶切的方式时,上样结束后不需要洗脱目的蛋白,使用酶切缓冲液平衡后,向柱子或填料中加入含有特定蛋白酶的溶液开...