和元生物获得发明专利授权:“一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定...

具体步骤如下:1)菌体重悬,所述重悬液含二糖类化学物质;2)碱裂解;3)中和;4)澄清;5)浓缩换液;6)分子筛层析;7)制剂换液。本发明的工艺简便,通过在菌体重悬液中添加一定浓度的二糖(如蔗糖、海藻糖等),保护大肠杆菌碱裂解过程中的超螺旋质粒,进而简化下游层析纯化工艺,并提高质粒回收率,方便快捷,适于推广应用。

pCMV-N-Flag-BioID2 (邻近蛋白生物素标记质粒)

这种质粒包含了生物素标记的DNA序列,使其能够与靶蛋白质的邻近区域结合。这种技术的主要步骤包括:构建质粒:将生物素标记序列克隆进质粒中,通常使用特定的克隆技术(如PCR扩增和限制性内切酶切割)。表达和标记:转化表达宿主细胞,如大肠杆菌(E.coli),进行蛋白表达,并利用生物素标记的标记剂标记邻近蛋白。应用:用于...

“双非”高校,唯一单位发Nature Sustainability!|活性|催化剂|...

作者使用大肠杆菌细胞来进行研究,因为它们含有具有电催化ORR活性的膜间细胞色素c蛋白。为了提高细胞色素c的浓度和细胞外界面电子转移效率,作者采用了基因和纳米工程手段。将含有编码cytc蛋白的torY基因的质粒转入野生型(WT)细胞,以获得工程型(ET)细胞(图1)。在质粒中,强T7启动子导致ET细胞中的cytc转录和翻译率高...

北化刘子鹤:基于酵母的第三代生物炼制

但还有另一个方向,我们做基因组编辑的时候,要依赖于大肠杆菌做质粒构建,我们在想,是不是可以剔除大肠杆菌质粒构建这一步),直接把体外GoldenGate整合后的质粒转到酿酒酵母当中(见图4)(注:正常操作步骤是需要将其先转到大肠杆菌中进行质粒克隆)。有了这个想法之后,我们做了一个简单的尝试,我们发现效果比想象中的...

质粒转化大肠杆菌

本实验通过CaCl2对特定的大肠杆菌处理,制备感受态的细菌。这些细菌可使每微克超螺旋质粒DNA,如一些插入目的DNA片段的重组质粒,产生5×106~2×107个转化的菌落。当质粒与这些大肠杆菌混合后,质粒粘附在大肠杆菌的表面,在42℃的温度时,大肠杆菌出现热休克,质粒可通过大肠杆菌细胞膜上形成的空隙进入菌体内。随后,加入LB培...

生物质粒的规模化发酵生产

质粒DNA通常是在上游生物工艺中由大肠杆菌在发酵系统中生产,一般支持病毒载体和mRNA疫苗制造的质粒生产规模都在几十升至上百升,进行高密度发酵,对发酵生产设备要求较高(www.e993.com)2024年11月19日。大肠杆菌发酵密度高,需氧量大,对发酵培养系统的溶氧和传质能力提出了更高的系统性要求,包括关联重要配置搅拌能力、通气能力、系统自控能力等都要求颇...

超螺旋质粒DNA纯化方案 (高质量高纯度质粒的制备)

质粒DNA基因治疗药物是以质粒DNA为载体的基因治疗产品，一般选择大肠杆菌作为宿主细胞，提取出的质粒中DNA会以多种形式出现：超螺旋质粒DNA(scDNA)、开环DNA(ocDNA)、线性DNA和质粒DNA聚集体等。另外，还伴随有宿主蛋白(HCP)、宿主核酸(HCD)、RNA、内毒素等杂质。其中超螺旋质粒DNA（scDNA）是我们的...

比较基因组分析助力大肠杆菌进化研究

此外,进化枝A(非中国大肠杆菌ST1193分离株)和进化枝B(来自中国福州的分离株)之间携带的质粒复制子类型存在显著差异。IncQ1在60.9%的非中国E.coliST1193中被鉴定,但仅在来自中国福州的39.1%分离株中被发现(p<0.05)。Col156在84.0%的非中国E.coliST1193中检测到,但在中国福州的分离株...

mBio:首次揭示质粒编码的可介导替加环素耐药的新型多重耐药外排泵

通过克隆和接合实验,确证tmexCD1-toprJ1可介导肺炎克雷伯菌、大肠杆菌和沙门氏菌对甘氨酰环素类(替加环素)、四环素类、喹诺酮类、头孢菌素类和氨基糖苷类等多种药物耐药(MIC值增加4～32倍),这意味着tmexCD1-toprJ1也是一种新的质粒介导的喹诺酮耐药基因(PMQR)。

江南大学团队改造大肠杆菌生物合成藻蓝胆素达147.0 mg/L

第一,在生物合成过程中,前体供应是提高后续目标产物效价的关键因素。“以往的研究已经在大肠杆菌中实现了血红素的高效合成,但大量质粒的使用不仅对菌株造成较大负担,而且消耗了大量可用质粒。因此,使用替代方法来增强前体血红素的合成至关重要。”将异源DNA整合到基因组中可以实现稳定表达并解决质粒的负担,研究人员通...