《食品科学》:南阳师范学院唐存多副教授等:大肠杆菌L-苏氨酸脱氢...

将酶切产物连接至经相同的限制性酶进行同样双酶切的pACYCDuet-1载体,转化至E.coliBL21(DE3)感受态细胞,再经氯霉素抗性筛选和双酶切验证,挑取重组子,用通用引物ACYCDuetUP1Primer和DuetDOWN1Primer进行PCR检测,结果如图2B所示,片段长度约1100bp,大小与其预期条带大小相符。

大肠杆菌感受态细胞的制备及转化

大肠杆菌吸收外源DNA的过程被称为转化。细菌处于容易吸收外源DNA的状态称为感受态。用理化方法可以诱导细胞进入感受态,如电转化法、CaCL2法。CaCL2法是目前实验室常用的制备感受态细胞的方法,其原理是使细菌处于0°C、CaCl2低渗溶液中,细胞膨胀成球形,细胞膜的通透性发生改变,外源DNA附着于细胞膜表面,经42°C短时间...

质粒构建 | 从入门到精通

常见的感受态细胞非TOP10、DH5α、BL21莫属了,他们可是转运过程的小能手,负责质粒的克隆和表达。转化及鉴定简要步骤将连接产物加入感受态细胞,冰上放置30min、42°C热激转化或电转化,加入无抗性LB培养基,200rpm-37°C摇床摇45-60min后,涂至抗性或者其他筛选平板上,37°C培养过夜、挑取3-5...

酵母感受态细胞的制备和保存

虽然酵母细胞和大肠杆菌一样容易生长和转化,但它们需要不同的处理方法来制备感受态细胞和转化。酵母细胞像哺乳动物细胞一样,有类似的处理程序。典型的酵母感受态细胞制备协议如下:过夜培养你想转化的酵母菌菌株,使用营养丰富的培养基培养不含质粒的细胞。对于已经含有质粒的细胞,使用适当的选择性培养基来维持质粒。当细...

猪伪狂犬病毒gB基因在大肠杆菌中的分段表达

1.5重组表达质粒的构建将阳性质粒用EcoRI和SalI进行双酶切,回收gB各片段,连接至经同样双酶切的原核表达载体pGEX-6P-1中,构建原核重组表达质粒pGEX-6pgB-1、pGEX-6p-gB-3\pGEX-6p-gB-4和pGEX-6p-gB-5。转化至BL21感受态细胞。筛选阳性克隆,提取质粒,用EcoRI和SalI酶切鉴定,鉴定正确的阳性质粒送上海英骏生物...

大肠杆菌的分离和发酵培养基

向LB固体凝胶中添加特定的抗生素(如氨苄青霉素、卡那霉素等),可以选择性培养对该抗生素耐受的菌株并将非耐受的菌株去除,菌体对抗生素耐受的原因是由菌体质粒中含有抗生素抗药基因所赋予的(www.e993.com)2024年11月19日。如:在制备大肠杆菌DH5α感受态细胞的过程中,添加氨苄青霉素的LB培养基可作为筛选含氨苄青霉素基因质粒的大肠杆菌。

专注清洁基因组大肠杆菌生产,Scarab已开发17款产品涉足四大应用...

Scarab利用清洁基因组大肠杆菌技术开发出了五个系类的产品,这五个系列分别为载体蛋白系列、化学感受态细胞系列、电感受态细胞系列、IS(插入序列)检测系列以及蛋白表达系统系列,产品类别达17种。五个系列17种产品这些产品大致被应用于四个领域:无质粒生产

为少年“追星”科学家铺路 一场中学生与顶级科学家的对话

在一次小组实验之中，她需要将质粒转化进大肠杆菌体内，但在此之前，感受态细胞需要经过冰浴、90秒热激、培养等流程，才能保证感受态细胞的活性。几次实验失败之后，佘悦杭慢慢掌握了操作的技巧，“就像盲人摸象一样，当你在黑暗中前行的时候，突然你发现成功了，然后那一瞬间有一股自豪感油然而生。”下了课，她...

为少年“追星”科学家铺路

在一次小组实验之中,她需要将质粒转化进大肠杆菌体内,但在此之前,感受态细胞需要经过冰浴、90秒热激、培养等流程,才能保证感受态细胞的活性。几次实验失败之后,佘悦杭慢慢掌握了操作的技巧,“就像盲人摸象一样,当你在黑暗中前行的时候,突然你发现成功了,然后那一瞬间有一股自豪感油然而生。”...

血清4型Ⅰ群禽腺病毒Hexon、FierⅠ、FiberⅡ基因的原核表达

SDSX-1病毒株,本实验室鉴定保存;pEASYBluntE1ExpressionVector,Trans1-T1感受态细胞,BL21转化菌株,均购自北京全是金生物有限公司。1.2试剂盒病毒DNA提取试剂盒,胶回收试剂盒,质粒DNA提取试剂盒,T1载体试剂盒均购自北京全是金生物有限公司。1.3培养基...