正常小鼠原代真皮纤维原细胞培养
3、细胞爬片。将洗净的盖玻片放入6孔培养板中,接种细胞为3×104个/孔,48小时候细胞可以长满,用镊子取出铺满细胞的盖玻片备用。4、细胞固定:用PBS洗涤细胞,之后放入乙醇丙酮混合液中,固定10min,空气中自然干燥。5、特异性抗体:按照说明书稀释比要求稀释抗体,加入抗体,放置37℃孵育60min。6、洗涤:1×PBS(...
偷偷在「培养皿」里直接做免疫荧光,结果竟然……(附免费试用)
??弃去通透缓冲液并用200μLPBS清洗细胞。??用200??L封闭缓冲液封闭30分钟。2.3.染色和封片??在封闭步骤中,准备足够的抗体稀释缓冲液来稀释一抗和二抗。??在抗体稀释缓冲液中稀释一抗(α-微管蛋白:1:200稀释)。??加入150??L一抗,孵育2小时(请注意,有些抗体...
免疫荧光显微成像详解(上)——免疫荧光原理、步骤
一般采用DAPI进行复染,目的是形成细胞轮廓,从而更好地对目标蛋白进行定位。8、封片为了长期保存,我们需要对样本进行封片,用吸水纸吸干爬片上的液体,一般用缓冲甘油等或专门的抗荧光淬灭的封片液。9、荧光观察有条件的话最好立即用荧光显微镜观察拍照,若不能及时拍照,也要做好封片和封固,保持避光和湿度。荧光...
安徽中医药大学等:灵芝多糖调控抗氧化因子表达抑制乳腺癌恶性表型...
取出爬片,以抗淬灭封片剂封片,于荧光倒置显微镜下观察并拍照,使用LASAFLite软件处理,计算凋亡率。凋亡率=TUNEL阳性细胞/DAPI阳性细胞2.4流式细胞术检测细胞凋亡MCF-7、MDA-MB-231细胞分别以3×105个/孔接种于12孔板中,置于培养箱中培养过夜。按“2.3”项下方法进行分组和给药...
一文汇总,支原体检测方法|细胞|阴性|培养基|pcr_网易订阅
1.严格配制工作液及封片液。2.保证作为指示细胞的VERO细胞没有被支原体污染。3.必须同时设立阳性及阴性对照,注意重复,以排除假阳性和假阴性结果。4.应全面观察爬片,并注意可疑阳性的荧光点是凋亡小体还是支原体污染。5.可适当调整荧光染料的工作浓度和染色时间,避免出现非特异性染色,如胞浆着色。