你知道吗?中枢神经系统退行性疾病与某个神经元丢失有关

取出细胞爬片于室温在4%多聚甲醛中固定20min;PBS浸洗3次;在每个样品中加入50μL的TUNEL工作溶液。在37℃下孵育30～60min。用每孔200μL的PBS清洗细胞1～2次。50%甘油封片,荧光显微镜下观察拍照,计算每个视野中阳性细胞所占比例。各组PC12细胞培养24h以后,弃去细胞上清,无菌PBS洗涤3次,0.25%胰蛋白酶消化...

瑞芬太尼对BV??2小胶质细胞沉默调节蛋白2及炎症因子的影响

细胞爬片取出后,滴加4',6??二脒基??2??苯基吲哚(1∶1000)室温避光孵育5min,随后用0.01mol/LPBS漂洗3次,每次5min。最后,吸水纸吸干爬片上的液体,用含抗荧光淬灭剂的封片液封片,于荧光显微镜下观察SIRT2、Iba1在BV??2小细胞株上的表达。1.5.3Westernblot实验干预结束后,弃去上清液,PBS清洗...

敲重点-上中医等:葛根芩连汤抑制TNF-α诱导的Caco-2细胞氧化损伤...

取处于对数生长期的Caco-2细胞,接种于细胞爬片上,按“2.5”项下方法分组并给药,24h后吸弃培养板中液体,加入PBS洗涤,于4%多聚甲醛中固定,加入0.5%TritonX-100室温通透,滴加正常山羊血清,室温封闭。吸干封闭液,滴加Nrf2抗体(1∶50),放入湿盒,4℃孵育过夜。浸洗,吸干,滴...

小鼠原代海马神经元细胞的分离培养方法!

(1)细胞爬片取3片玻璃片于24孔板中,每孔加入培养基1mL,加入细胞0.02million个/孔。置培养箱2h或过夜。(2)固定细胞爬片后,吸出培养基,用PBS洗1遍,加入4%PFA于4℃固定30min。用PBS洗3×5min/次。也可最后一次不吸出PBS,放4℃过夜。(3)破膜封闭将玻片除去水分,置于培养皿支撑物上,玻璃片封闭...

免疫荧光显微成像详解(上)——免疫荧光原理、步骤

一般采用DAPI进行复染,目的是形成细胞轮廓,从而更好地对目标蛋白进行定位。8、封片为了长期保存,我们需要对样本进行封片,用吸水纸吸干爬片上的液体,一般用缓冲甘油等或专门的抗荧光淬灭的封片液。9、荧光观察有条件的话最好立即用荧光显微镜观察拍照,若不能及时拍照,也要做好封片和封固,保持避光和湿度。荧光...

抗γ-氨基丁酸A型受体脑炎:以癫痫为突出表现

细胞外液洗3次,加入AlexaFluor488荧光素标记的山羊抗人IgG二抗(Molecularprobes公司,美国;稀释比1∶800),室温孵育20min(www.e993.com)2024年11月10日。细胞外液洗3次后用4%多聚甲醛室温下固定5min。磷酸盐缓冲液洗3次后吸去多余液体,晾干玻片,甘油封片后置于激光共聚焦显微镜下观察。以神经系统非炎性疾病患者脑脊液作为对照。

激光共聚焦的前期步骤

1、做细胞爬片(爬片的步骤就不详述了),注意:洗片子的PBS和固定用的4%多聚甲醛一定要新鲜配制的(一周以内的都能用),因为PBS和4%多聚甲醛放久了后,都会有自发荧光。2、抗体的孵育:预实验的时候荧光根据文献和经验设定一、二抗的浓度,一抗4度孵育过夜(时间8～12h);二...

偷偷在「培养皿」里直接做免疫荧光,结果竟然……(附免费试用)

??将细胞在200??L通透缓冲液中孵育10分钟。??弃去通透缓冲液并用200μLPBS清洗细胞。??用200??L封闭缓冲液封闭30分钟。2.3.染色和封片??在封闭步骤中,准备足够的抗体稀释缓冲液来稀释一抗和二抗。??在抗体稀释缓冲液中稀释一抗(α-微管蛋白:1:200稀释)。