过年亲手放过的烟花,在师妹的 qPCR 扩增曲线上复现了
1、当面对qPCR扩增曲线异常时,如何应对?正常的qPCR扩增曲线应为S型,理想的CT值范围在20~30。若出现CT值偏大、无平台期或平台期下降等异常情况,可尝试以下调整:●若CT值偏大,可能是模板量不足或基因表达丰度低,建议增加模板量并观察CT值是否按预期倍数减少。●考虑qPCR反应条件或...
脂血合并溶血,乙肝DNA该如何定量?|乙肝|检测|样本|标本|扩增|...
对于重度的溶血样本,可以根据内标有无扩增曲线决定是否重抽样本;对于脂血的样本,可以通过高速离心进行检测;而对于重度的黄疸、脂血和高IgG样本,若内标无扩增曲线,或者目的基因扩增曲线出现异常,可以使用特征指标正常阴性血清稀释待测样本,从而降低抑制物对检测结果的影响,但同时一定要注意避免因过度稀释导致假阴性结果的发...
qPCR 曲线「丑」到拿不出手!除了引物,这些问题也要注意
CT值重复性差:仪器、试剂、耗材、实验操作细节等众多因素,具体问题具体分析。3.qPCR扩增曲线异常:正常扩增曲线应呈平滑S型。常见异常包括扩增曲线锯齿状(RNA浓度低或体系含有杂质);无法到达平台期(模板浓度太低,循环数太少或扩增效率低);除了CT值、扩增曲线异常,我们还常遇到RNA降解、引物特异性...
国产PCR核酸扩增仪10月热度榜(下),采购必备
TOP8、AppliedBiosystemsProFlex梯度PCR扩增仪品牌型号:AppliedBiosystems|ProFlex价格:面议生产商:赛默飞世尔科技生命科学产品产品介绍:ProFlex??PCR系统将AppliedBiosystemsTMPCR仪所具备的可靠性和高性能与适合当今工作环境的灵活配置和控制特性相结合。具有最为灵活的模块配置,满足不断变化的现代化实...
成人呼吸道感染病原诊断核酸检测技术临床应用专家共识(2023)
作为传统的经典定量分析方法,荧光探针法的灵敏度和特异度明显优于底物发光法,但特异性引物探针的成本和对仪器的要求较高。其结果判读较为复杂,需要对扩增曲线和熔解曲线进行分析。2.1.3性能验证要求定量检测需验证的性能指标包括:正确度、精密度(包括测量重复性和测量中间精密度)、不确定度、特异度(包括抗干扰能...
qPCR 曲线杂乱、重复性差?你可能忽略了这些点(含福利)
qPCR实验忙活一周,一看曲线两眼「懵」,不是溶解曲线杂乱无章,就是扩增曲线飘忽不定,更糟糕的是RNA降解、复孔重复性差、CT值异常等问题层出不穷…….饱经qPCR摧残的过来人表示,竹篮打水一场空的结局屡见不鲜(www.e993.com)2024年8月5日。qPCR问题千千万,不能一概而论,对症下药最重要!
《食品科学》:南京师范大学江芸教授等:发酵香肠中产志贺毒素大肠...
大肠杆菌的4种毒力基因stx1、stx2、eaeA和hly扩增良好,4种毒力基因标准曲线方程如表3所示,其中x为标准品拷贝数对数值,y为测得的Ct值。由表3可知,相关系数R2均大于0.99,扩增效率在88.1%~96.9%之间,且Ct值在6~30之间,满足标准曲线要求。3.2香肠中O157组和O26组毒力基因表达变化...
新冠内标扩增反应曲线呈锯齿状,原因是……
2.扩增曲线呈锯齿状且不连续如图9。原因是典型的ROX添加不当导致的异常结果。图9(图片来源于网络)另一篇推文《新冠核酸试剂内标的解释》详细地介绍了内标的定义、设置及优缺点,并对内标无扩增原因进行了分析,如图10、11所示。图10内标无扩增原因分析(图片来源于网络)...
300名医护跨“粤”守“沪”:保证检测能力 是我们支援的意义
“上海是一座2500万人口大市,标本量多可想而知,且大多数是高风险区送来的标本,在扩增区顶着不少压力审读结果和研判核酸扩增曲线,工作全过程我始终谨记:‘专心细致,不漏一阳’,同时双人审核。”韶关市第一人民医院检验科副主任技师赖玉玲称,由于人手不足,从4日至8日,他们连续上了五个夜班,加班加点保证核酸检测的...