WB 条带还能「找黄牛」,200 元一套,导师:你试下就可以退学了
不过WB实验频繁造假的背后,逃不开实验本身的「坎坷」。作为第一代玄学实验,WB真的太太太容易翻车了。要么是辛辛苦苦跑的蛋白,条带不清晰没办法使用,要么就是趋势不明显,条带淡得可怜。图源:网络本文学霸菌整理了6个WB实验细节技巧,带你从细节手法出发,优化WB实验结果。6个WB细节,带你靠自己...
5个案例解析WB出现非特异性条带的原因
原因:所检测蛋白存在多种剪接体,导致分子量大小不同。建议:查阅文献或者通过搜索数据库来确定该蛋白是否存在多种长度不同的编码mRNA。-6-原因:蛋白存在二聚体或多聚体。建议:SDSloadingbuffer中现用现加β-巯基乙醇或DTT。-7-原因:样本存在外源转入蛋白。建议:检查所用样本是否有过被外源进去...
艾美捷-WB常见问题-50问【上】
增多巯基乙醇量,煮沸变性时间延长,可以打开二聚体。b)蛋白本身的修饰如:糖基化,磷酸化等。12蛋白转移不到膜上,但胶上有,同时Marker转上去了,为什么?可能是:a)样品浓度过低;b)转移时间不够。13磷酸化抗体的检测样本制备时是否一定要加NaF等?NaF是一种广谱磷酸化酶的抑制剂,一般最好...
蛋白样品在跑胶前要如何处理
1.将之前配好的胶固定在电泳装置上,加入1X电泳液2.拔出梳子,应该两侧同时用力,缓慢拔出,注意在拔除梳子时防止气泡进入梳孔使其变形,若上样孔有变形,可用适当粗细的针头拨正。3.加入蛋白样品,一般10孔的梳孔,每孔可以加入20ul-40ul蛋白样品,15孔的梳孔,每孔可以加入10ul-30ul蛋白样品,是用微量注...
WB如何快速蛋白定量(Bradford 法)
5.Bradford法加完样之后需立刻马上测量,OD值能稳定保持10分钟左右,如果不能马上测量,建议换用BCA法。6.终极大招:如果你已经是老司机了,还有个方法不用测蛋白浓度,只要在显微镜下估测各组细胞密度差不多,直接提蛋白变性上样跑WB即可。但老司机也有翻车的时候,请慎用。
【小优细节君】跨膜蛋白SLC怎么做?
首先作者在293细胞上过表达了Fpn1,但是在WB检测时发现蛋白并没有跑下来(在蓝色箭头所指位置),猜测应该是蛋白不溶解或者发生了聚集(www.e993.com)2024年10月22日。图1Fpn1过表达检测这里不得不提下全膜做WB的重要性,可以帮助我们了解更多的信息。如果只是裁膜做,就会发现目的区域没有条带,进而怀疑是试剂或者操作的问题,那就是另外一个story...
血泪教训,Western blot最全避雷手册
增多巯基乙醇量,煮沸变性时间延长,可以打开二聚体。b)蛋白本身有修饰如糖基化、磷酸化等均会增大蛋白分子量。12、蛋白转移不到膜上,但胶上有,同时Marker转上去了,为什么?答:可能是:a)样品浓度过低;b)转移时间不够。(注意!Marker并不是蛋白是否转移到膜上的标准,它只是为我们提供简单的指示作用。)13、...
磷酸化抗体使用建议,听听CST专家怎么说
StrippingBuffer:配制100ml时,取0.76gTris碱,2gSDS和700μlβ-巯基乙醇,加蒸馏水至100ml。用盐酸调整pH到6.8(所有溶液用Milli-Q或相当级别的水配制)。版权声明本网站所有注明“来源:生物谷”或“来源:bioon”的文字、图片和音视频资料,版权均属于生物谷网站所有。非经授权,任何媒体、网站或个人不得转载...