利用质谱技术对大肠杆菌BL21 (DE3)进行动态通量平衡分析
LC/GC-MS)对高密度细胞培养大肠杆菌BL21(DE3)来表达重组蛋白的补料分批发酵过程进行了废弃培养基分析,并结合之前报道的GSMM,发现三羧酸(TricarboxylicAcid,TCA)循环通量的变化与重组蛋白生产期间能量需求相关性,揭示了氨基酸是合成其他细胞代谢物的重要枢纽。今天...
...不同转录的剪切mRNA的获得及猪白细胞介素18结合蛋白的生物学功能
白细胞介素-18结合蛋白(Interleukin-18bindingprotein,IL-18BP)是促炎细胞因子白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)的天然调节分子,在调节细胞免疫因子干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的表达中发挥重要作用。研究表明,IL-18被确定为IFN-γ的诱导剂,并与IL-12协同作用,诱导T细胞和自然杀伤(NK)细胞产...
一键领取生物药残留检测利器:Protein A、HCP、宿主DNA与内毒素...
宿主细胞蛋白(Hostcellprotein,HCP)是指病毒性疫苗和基因工程药物中来源于宿主细胞的蛋白成分,不仅有可能诱导机体产生抗HCP抗体,引起过敏反应,还有可能有“佐剂效应”引起机体对蛋白质药物产生抗体。残留的HCP会存在潜在的安全风险,需进行严格的检测。01Elisa法针对宿主细胞蛋白(HCP)残留检测,明星产品HCPElisa试剂...
重组蛋白表达常见异常及解决方案
也可能是缺少翻译后修饰导致不正确折叠,还可能是蛋白本身疏水性强等各种原因,可以通过降低诱导温度及诱导剂浓度、引入分子伴侣共表达、换专用感受态等方式来解决,或者包涵体纯化后复性,注意包涵体纯化复性一般是his标签蛋白,常用变性剂为尿素和盐酸胍,其他纯化标签需要注意是否兼容变性剂。
蛋白互作检测——Pull Down实验方法分享
(2)将BL21细菌扩大培养,至OD=0.6-0.8时,加入IPTG;(3)设置IPTG浓度,诱导时长以及诱导温度(浓度可以时0.3、0.5、0.7等,时长可以暂定16h或者12h等;温度可以时28℃或者16摄氏度等都可以)(4)转速也会影响蛋白表达情况,可以暂定一个转速,到时间后,离心,收集菌体;...
诺如病毒GII-4重组P蛋白疫苗,真的有开发潜力吗?Vaccines:从免疫...
通过使用IPTG诱导表达NoV重组P蛋白,成功获得了酶消化上清液(www.e993.com)2024年9月19日。SDS-PAGE结果显示,在35KDa处有一条清晰的条带(图1A),表明消化成功并含有NoV重组P蛋白,但上清液中存在杂蛋白。通过组氨酸标签蛋白纯化方法,成功分离纯化了酶消化上清液。SDS-PAGE检测结果显示,NoV重组P蛋白主要存在于洗脱液1和2中,并有少量杂蛋白存在(图1...
《食品科学》:吉林农业大学任大勇副教授等:唾液乳杆菌膜外蛋白对...
1、重组菌E.coliBL21(DE3)的制备及EF-G纯化验证结果PCR扩增后1%琼脂糖凝胶电泳验证,ef-g基因正确克隆。pET-ef-g重组质粒导入E.coliBL21(DE3)中,卡那霉素筛选,PCR扩增1%琼脂糖凝胶电泳验证。经IPTG诱导重组E.coliBL21(DE3)菌株大量表达EF-G,EF-G蛋白分子质量约为77kDa,EF-G条带位于66.4~97.2...
植物中验证蛋白相互作用的Pull-down和Co-IP详细技术方案
5.1.1GST融合蛋白的原核诱导表达(1)将表达GST融合蛋白(实验组)和GST(对照组)的质粒分别转入BL21菌株中;(2)分别挑取阳性单克隆于3mL含有抗生素的LB液体培养基中,37°C,200rpm,过夜培养;(3)将过夜培养的3mL菌液接入300mL(1:100)含有抗生素的LB液体培养基中,37°C,200rpm摇菌2.5...
贝克曼库尔特 | 高通量筛选大肠杆菌重组蛋白生产用酵母营养素
首先选择一个固定的诱导时间点。分别为培养启动后的3小时、3.75小时和4.5小时。下图所示为每种TB样培养基在诱导时间下所测荧光的平均值。荧光动力学清晰地表明不同培养基有不同的EcFbFP(黄素荧光蛋白)表达水平。表现出最强荧光信号的两个样本为:ProCel2,诱导点为3.75小时;ProCel5,诱导点为3小时。经过7.7...
微管蛋白的可溶性表达及纯化
1、将重组质粒(BL21-2??2或Rossatta-2??2)的表达菌37℃摇培过夜后,1:20扩配(约需1h15m);2、至OD600=0.5~0.7时(约1h15min~1h45min),在15-(0.5-24,0.8-12);20-(0.5-12,0.8-8);28、25-(0.8-8)进行蛋白诱导表达,具体条件根据摇床使用情况而定;...