你知道吗?中枢神经系统退行性疾病与某个神经元丢失有关

取出细胞爬片于室温在4%多聚甲醛中固定20min;PBS浸洗3次;在每个样品中加入50μL的TUNEL工作溶液。在37℃下孵育30～60min。用每孔200μL的PBS清洗细胞1～2次。50%甘油封片,荧光显微镜下观察拍照,计算每个视野中阳性细胞所占比例。各组PC12细胞培养24h以后,弃去细胞上清,无菌PBS洗涤3次,0.25%胰蛋白酶消化...

免疫荧光显微成像详解(上)——免疫荧光原理、步骤

一、实验步骤免疫荧光实验的主要步骤包括样片制备、固定及通透(或称为透化)、封闭、抗体孵育、封片及荧光检测等。1、样品准备对于单层生长细胞,在传代培养时,将细胞接种到预先放置有处理过(70%乙醇中浸泡)的盖玻片的培养皿中,待细胞接近长成单层后取出盖玻片即可,操作过程要小心,防止细胞脱片。对于悬浮生长细...

敲重点-上中医等:葛根芩连汤抑制TNF-α诱导的Caco-2细胞氧化损伤...

取处于对数生长期的Caco-2细胞,接种于细胞爬片上,按“2.5”项下方法分组并给药,24h后吸弃培养板中液体,加入PBS洗涤,于4%多聚甲醛中固定,加入0.5%TritonX-100室温通透,滴加正常山羊血清,室温封闭。吸干封闭液,滴加Nrf2抗体(1∶50),放入湿盒,4℃孵育过夜。浸洗,吸干,滴...

偷偷在「培养皿」里直接做免疫荧光,结果竟然……(附免费试用)

??弃去通透缓冲液并用200μLPBS清洗细胞。??用200??L封闭缓冲液封闭30分钟。2.3.染色和封片??在封闭步骤中,准备足够的抗体稀释缓冲液来稀释一抗和二抗。??在抗体稀释缓冲液中稀释一抗(α-微管蛋白:1:200稀释)。??加入150??L一抗,孵育2小时(请注意,有些抗体...