【血管新生之钥】HUVEC细胞培养攻略
1.明胶包被:HUVEC细胞需在涂有2μg/cm2重组人纤连蛋白或1%明胶的聚苯乙烯瓶或孔中培养。使用2μg/cm2重组人纤连蛋白或1%明胶包被培养瓶或孔板,置于37℃孵育1h,在加入HUVEC细胞前使用无菌蒸馏水去重组人纤连蛋白或除明胶;2.以25cm2培养瓶为例,向培养瓶中加入HUVEC细胞悬液(完全培养基中),每两天更换一次...
ELISA实验技巧|抗原|抗体|酶标|特异性|elisa_网易订阅
2.包被:将抗原包被到固相载体上,以便与样品中的抗体结合。3.阻断:加入阻断液,封闭未结合的抗原位点,防止其与酶标抗体结合。4.清洗:清洗固相载体,去除未结合的成分。5.加入酶标抗体:加入酶标抗体,与已结合的抗原进行6.特异性显结色合反。应:加入显色底物,使酶催化底物反应生成有色产物,通过颜色变化...
胡总专栏 | 关于封闭液
最常见的是PBS或TBS,还有一些buffer比如碳酸盐,硼酸盐,都是碱性的缓冲液,醋酸盐buffer属于酸性的。记住如果检测磷酸化蛋白,或用于碱性磷酸酶系统,不要用PBS。具体的使用还得在实战中进行摸索。还有一类特殊的封闭剂属于特殊的有针对性的的封闭,最著名的就是HAMA。免疫分析中出现问题的一个常见原因是干扰性抗体,...
ELISA法检测抗体的效价
将抗原(BSA-Ag偶联物)用包被缓冲液稀释为10ug/ml(视抗原,可1-40ug/ml)左右(预实验中确定最适浓度),加入聚苯乙烯板(0.1ml/孔),加封口膜于4℃过夜(或37℃下,孵育6h)。可包被BSA溶液或只加包被液作为空白对照。2、封闭:弃去孔内液体,每孔加200ul封闭液(近满),37℃湿盒保持6h(或4℃过夜),避免非特...
纳米抗体制备技巧分享
将最后一轮筛选得到的噬菌体梯度稀释后,各取10??L加入到OD600nm为0.5的TG1菌液中,37℃培养30分钟后涂布含有氨苄霉素的2xYT培养板上,37℃过夜培养第二天得到单克隆菌落;随机挑选至少192个单菌落进行检测,选取抗原包被孔与相应对照孔吸光值比例大的菌落送去测序(独立两次phage-Elisa分析),得到候选纳米抗体的基因...
细菌,真菌,病毒——感染,免疫反应以及治疗用药差异
体液免疫对部分真菌感染有一定保护作用,如特异性抗体可阻止真菌转为菌丝相以提高吞噬细胞的吞噬率;抗白色念珠菌抗体与菌表面甘露醇蛋白质复合物结合,阻止本菌粘附宿主细胞;全身性白色念珠菌感染,尽管其迟发型变态反应阳性,或通过被动转移致敏淋巴细胞,还必须同时输入特异抗体才起保护作用(www.e993.com)2024年9月19日。
中华人民共和国农业农村部公告第322号
(1)抗原包被板96孔塑制微孔板,无色透明,干燥,无杂质吸附。(2)抗猪瘟酶标抗体蓝绿色澄明液体。(3)阳性对照血清无色或淡黄色澄明或半透明液体。(4)阴性对照血清无色或淡黄色澄明或半透明液体。(5)样品稀释液橙黄色或略带红色的澄明或半透明液体。
直接竞争ELISA法检测蜂蜜中氯霉素残留
使用蒸馏水或者PB溶液配制标准溶液进行ELISA实验时,A450nm值偏低,而用PBS或PBST可提高A450nm值,且使用PBS时,IC50值低而Amax/IC50高,可能原因是PBS溶液具有一定离子强度,有较好的缓冲能力,使用其作为标准品稀释液进行ELISA反应时,不会破坏缓冲体系的pH值和离子浓度,因此选择PBS稀释标准品检测效果最佳。包被温度的确...
大鼠P物质(SP)酶联免疫说明书
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠P物质(SP)水平。用纯化的大鼠P物质(SP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入P物质(SP),再与HRP标记的P物质(SP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
三聚氰胺免疫层析试纸检测方法研究
用重氮法[3]合成三聚氰胺-牛血清白蛋白(作为包被抗原),用于间接酶联免疫吸附实验[4,5],测定三聚氰胺特异性抗体的效价。具体方法是,用包被液(0.15gNa2CO3,0.29gNaHCO3,0.1gNaN3,加蒸馏水至100mL,用1mol/LHCl调pH值为9.6)将三聚氰胺-牛血清白蛋白稀释成1μg/mL的溶液,取100μL包被酶标板,4℃过夜(约15h)...