PCR、qPCR、dPCR、RT – PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR;傻傻分不清?

在RT-PCR中首先经反转录酶将一条单链RNA逆转录成cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。RT-PCR技术灵敏且应用广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。

一文读懂:PCR,qPCR,Real-time PCR,RT-PCR和RT-qPCR

■而还有一种是使用荧光探针,又叫TaqMan探针法,其原理是根据目的基因设计一个能与之特异性结合的荧光探针,该探针包含两个基团:一个荧光基团和一个淬灭基团,正常情况下因为淬灭基团的存在导致荧光基团无法发出荧光,而在扩增时探针结合到DNA的模板上,并且扩增到探针位置时两个基团被切开,从而荧光基团可以发出荧光,同样...

一文读懂PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR和Real-Time PCR之间的区别

PCR的基本原理与DNA在体内复制相似,特异性主要依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性、退火和延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:DNA模板经过高温(95℃左右)加热一段时间后,解离成单链,以便能够与引物结合;②DNA模板与引物的退火(复性):将温度降至55℃左右时,引物与模板DNA单链按碱基互补配对...

分子克隆技术全攻略

分子克隆原理分子克隆技术简单地可以理解为将DNA片段(或基因)与载体共价连接,然后引入寄主细胞,再筛选获得重组的克隆。1)获得所需的插入物(目的基因),目的基因可以是来自真核、原核生物的任何细胞类型的DNA或mRNA,也可以是实验室直接合成的。通过PCR、酶切等技术将基因组DNA或cDNA(通过mRNA体外逆转录合成cDNA)中...

植物抗病基因克隆的方法和技术研究进展

功能克隆根据克隆基因的原理又可分为两条路线,一条是分离纯化已知的蛋白质或多肽,制备该蛋白的特异抗体,利用标记的特异蛋白抗体作为探针筛选由表达型载体建立的基因组文库或者cDNA文库,通过免疫杂交筛选到重组克隆,并最终克隆目的基因;第二条路线是将蛋白质纯化后测定其N端一段氨基酸序列,根据蛋白质密码子编码规律和...

中国水稻育种百年,出现哪些关键基因

其基本原理是利用与目标基因紧密连锁或表现共分离的分子标记对选择个体进行目标以及全基因组筛选,从而减少连锁累赘,获得目标个体(www.e993.com)2024年11月28日。GS是MAS的延伸,是近年来动、植物分子育种的全新策略,已成为分子技术育种的热点和趋势。分子技术育种是对传统育种理论和技术的重大突破,实现了对基因的直接选择和有效聚合,大幅度缩短了...

有哪些方法可以用作植物转基因

(一)电击法电击法基本原理是电脉冲使细胞膜产生可逆性的“微孔”,外源DNA可通过这些微孔进入受体细胞原生质体内。1985年Fromm等用电击法将pat基因导入了玉米原生质体,得到了该基因稳定表达的愈伤组织。随着玉米原生质体再生技术的研究取得进展,1988年Rhodes等用电击法转化玉米原生质体,首次获得了完整的转基因植株。电击...

重组DNA技术(分子克隆)技术方案

DNA又称基因工程(GeneticEngineering)。这项技术是在体外按照一定的目的和方案对DNA分子进行人工操作,将同一来源或异源的基因进行重组,然后把它们引入适当受体细胞中,随着该细胞的繁殖,DNA重组体得到扩增,并同时得到表达。这样就可以获得大量重组DNA的产物。重组DNA技术又称为分子克隆(MolecularCloning)。克隆一词原...

【陈巍学基因】视频130:发现和确认 TLR9 通路在记忆形成过程中的...

论文《FormationofmemoryassembliesthroughtheDNA-sensingTLR9pathway》通过:高通量测序、单细胞核测序、对小鼠做基因敲除后的行为学实验、药物干扰下的小鼠行为学实验等一系列实验,深入研究并确认TLR9通路是一种全新的记忆形成通路。本视频深入解读这篇论文,包括:方法设计、实验原理、结果分析,向观众全面展...

史上最全的30个生物实验技术及原理

二、足印法(Footprinting)足印法(Footprinting)是一种用来测定DNA-蛋白质专一性结合的方法,用于检测目的DNA序列与特定蛋白质的结合,也可展示蛋白质因子同特定DNA片段之间的结合。其原理为:DNA和蛋白质结合后,DNA与蛋白的结合区域不能被DNase(脱氧核糖核酸酶)分解,在对目的DNA序列进行检测时便出现了一段无DNA序列的空...