【前沿进展】PNAS丨陈学峰课题组揭示同源重组修复调控的新机制
该研究以酿酒酵母为模型,鉴定了Ty1转座子调节蛋白Rtt105为一个新的重组酶调节因子,发现Rtt105直接促进重组酶Rad51与单链DNA(ssDNA)的动态组装,并协调修复蛋白RPA与Rad51在ssDNA上的动态结合行为,从而在同源重组修复过程中发挥独特的调控作用。同源重组对于保护停滞或塌陷的复制叉、修复染色体断裂以及减数分裂过程中...
酿酒酵母染色体臂的精简与合成重构研究获进展
进一步,该研究通过同源重组介导的染色体截短技术在二倍体中实现了其中一条chrXIIL的整体删除,并发现仅必需基因染色体不足以替代左臂支持菌株生存,需要增加额外的关键基因。通过对11基因组合(10个必需基因+1个非必需基因)的系统性测试,研究未获得可支持菌株存活的组合。即使只需要回补2个基因,也存在超过1000种可能,故亟...
中外合成生物学技术差距:识别关键领域与追赶路径
构建环节在构建环节,中国在DNA拼接技术上与海外同步,酶切链接、Gibson链接和酵母同源重组等技术中外间不存在代差。DNA合成和基因编辑技术也在快速追赶,尽管面临专利封锁的挑战。海外有CodexDNA、DNAScript、TwistBioscience、CustomArray、ThermoFisherScientific、EditasMedicine、CRISPR等代表企业,国内企业如金斯瑞、...
武汉大学刘天罡 | 丝状真菌萜类生物合成基因簇的高效探索
自动HTP生物流体工作流程使用先进的液体处理技术来加速PCR扩增、使用酵母同源重组的质粒构建和AO原生质体的转化以重构萜类BGC的过程(图2b)。使用BiomekFXP实验室自动化工作站(BeckmanCoulter)作为自动平台进行PCR扩增、PCR产物回收和质粒提取,以及大肠杆菌、酿酒酵母和AO原生质体的转化。使用分子装置Qpix460来采集菌落。...
酵母表面展示与噬菌体展示在纳米抗体研发中大比拼
噬菌体展示文库采用酶切连接或者同源重组,其中酶切连接的方式大家最常用,相对于体外同源重组成本更低。体外同源重组可以大大提高连接效率,但成本非常高。酵母表面展示是将线性化的目的片段和线性化载体按一定比例电转化酵母感受态细胞,片段和载体会在酵母细胞内通过同源重组的方式环化为质粒,成本低廉,操作简单。
北化刘子鹤:基于酵母的第三代生物炼制
后来我们发现,其实是因为酿酒酵母的同源重组能力很高,我们把体外做的利用GoldenGate构建的质粒转到酿酒酵母当中,除了已经合成的质粒还有大量游离的线性的片断,由于我刚刚说的同源片段的存在,酿酒酵母就会随机整合(同源片段),导致gRNA的丢失(www.e993.com)2024年9月17日。有了这个想法,我们把它的marker(筛选标记)从末端移到了中间(见图4,图5),也...
大连化物所实现甲醇酵母的高效代谢改造
近日,中国科学院大连化学物理研究所合成生物学与生物催化创新特区研究组研究员周雍进团队在甲醇酵母合成生物学研究中取得进展,实现了甲醇酵母的高效代谢改造。科研人员在甲醇酵母代表菌株毕赤酵母中,构建了基因编辑工具,强化了同源重组从而实现了精确基因编辑,鉴定了染色体基因整合位点并表征了系列不同表达强度的启动子,此外...
实施基因精准编辑 毕赤酵母变高效“细胞工厂”
然而,基因的随机重组大大降低了外源基因的“移植成功率”。同时,外源基因的随机插入,或将导致细胞死亡或功能受损。此外,成功“打入”细胞内部的外源基因,或由于缺乏启动子而不能正常表达,导致了“颗粒无收”。针对这些问题,研究团队强化了毕赤酵母同源重组效率,发现了限制同源重组修复的关键基因RAD52,其高表达...
天津工生所在酿酒酵母基因组多样性编辑方面取得进展
酿酒酵母作为合成生物学重要的底盘细胞之一,可用于开发传统酿造食品、大宗化学品和高附加值产品。基因组编辑技术的发展,为加快酿酒酵母细胞工厂的构建与优化提供了强有力的使能技术,但当前研究集中于编辑工具本身的优化和同源重组介导的精准编辑。关于利用基因组编辑技术进行NHEJ介导的致基因组多样性突变和可遗传转录调控的...
南京工业大学团队重新编程解脂耶氏酵母的脂肪酸代谢
Δ8途径更适合在解脂耶氏酵母中合成ARA研究人员使用的底盘菌株系该课题组此前构建,具有较高同源重组效率和较高的OA产量。工作内容一:在解脂耶氏酵母中组装Mortierellaalpina的Δ6途径以合成ARA。结果表明,由两个底盘衍生的工程菌株WJ-2和WJ-3产生的ARA占总脂肪酸含量的0.24%和0.25...