...安徽工程大学张琴教授等:过表达去饱和酶基因对大肠杆菌脂肪酸...

枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)HB1310是1株已报道的高产油核桃内生菌,饱和酶是该菌株脂肪酸合成途径中的关键酶之一,安徽工程大学的叶景、徐思远、张琴*等人将克隆其去饱和酶基因de1、de2,实现这两种基因在E.coliBL21(DE3)中的单表达与共表达,探究去饱和酶基因过表达对E.coli油脂产量及其脂肪酸组分的影响,获...

《食品科学》:东北农业大学张微副研究员等:CRISPR/Cas-等温扩增...

CRISPR/Cas系统是存在于细菌和古细菌中的一系列防御机制,最早在大肠杆菌中被发现。这种防御机制的基本原理是入侵因子如病毒、质粒等衍生的短片段被捕获并整合到CRISPR序列位点中建立遗传记忆,随后将这些DNA转录加工成成熟的CRISPRRNA(crRNA)作为向导RNA,与Cas效应蛋白组装后形成的复合物可以特异性识别并切割与crRNA互补的...

mRNA疫苗超全知识汇总,看这一篇就够了!

利用电流打破细胞膜,并将环状DNA质粒引入大肠杆菌。此后,大肠杆菌被储藏于含有大量营养物质的溶液中进行繁殖扩增。大肠杆菌每20分钟分裂一次,4天内可以得到数万亿DNA质粒。提取并纯化DNA质粒,过滤溶液,去除细菌及其他物质。利用酶将纯化后的环状DNA质粒切割为链状。将所得溶液分装冷藏,通过质量控制环节,并运送至下一阶段...

质粒转化大肠杆菌

(作为分子生物学用大肠杆菌,是经过实验室改造过的工程菌。)实验原理本实验通过CaCl2对特定的大肠杆菌处理,制备感受态的细菌。这些细菌可使每微克超螺旋质粒DNA,如一些插入目的DNA片段的重组质粒,产生5×106~2×107个转化的菌落。当质粒与这些大肠杆菌混合后,质粒粘附在大肠杆菌的表面,在42℃的温度时,大肠杆菌出现...

HUST-China战队:大肠杆菌的蜕变—从致病祸首到合成生物学帮手丨...

科学家们先将自己所设计的基因连到质粒上,再将质粒导入进大肠杆菌里,便成功构建出了研究模板。之后再对导入质粒后的大肠杆菌的特性进行检测,一般检测为基因表达产物、基因表达效率等,进而可以验证出实际情况与理论预测是否相符、存在哪些误差等,即“判断设计的电路图中灯泡能不能正常亮起来”的过程。这一过程往往也是...

生物质粒的规模化发酵生产

转自:楚天人近年来随着基因/细胞治疗的突破以及mRNA疫苗的火热问世,对质粒的需求和大规模生产的要求愈发迫切,因此质粒的规模化生产显得尤为重要(www.e993.com)2024年11月19日。质粒DNA通常是在上游生物工艺中由大肠杆菌在发酵系统中生产,一般支持病毒载体和mRNA疫苗制造的质粒生产规模都在几十升至上百升,进行高密度发酵,对发酵生产设备要求较高。大...

超螺旋质粒DNA纯化方案 (高质量高纯度质粒的制备)

质粒DNA基因治疗药物是以质粒DNA为载体的基因治疗产品，一般选择大肠杆菌作为宿主细胞，提取出的质粒中DNA会以多种形式出现：超螺旋质粒DNA(scDNA)、开环DNA(ocDNA)、线性DNA和质粒DNA聚集体等。另外，还伴随有宿主蛋白(HCP)、宿主核酸(HCD)、RNA、内毒素等杂质。其中超螺旋质粒DNA（scDNA）是我们的...

质粒构建 | 从入门到精通

质粒构建的原理外源DNA经PCR扩增后,用限制性内切酶分别切割载体和外源DNA片段,DNA连接酶将二者进行连接,然后转入宿主细菌,通过筛选鉴定获得重组克隆。经过一系列的操作,「快递员」质粒就完成了呈递目标片段的工作。质粒构建流程示意图质粒构建的步骤...

综述| NAT REV MICROBIOL:微生物群落中的水平基因转移分析

另一种称为“转座子辅助捕获”的质粒扩增方法是用携带抗生素抗性的转座子标记分离的质粒,然后在外源宿主(如大肠杆菌)中扩增,再利用抗生素选择并复原质粒。但是,要准确定量自然群落中质粒的丰度或拷贝数目依然难以实现。通过将病毒组测序与微生物组测序相结合,有时可以通过分析CRISPR序列来鉴定可能的宿主。作为细菌适应...

武汉大学刘天罡 | 丝状真菌萜类生物合成基因簇的高效探索

剩下的9个片段可能受到长基因片段和引物特异性低的限制,手动扩增。通过同源重组将片段在酿酒酵母中组装成173个质粒。将组装好的质粒转化到大肠杆菌中进行复制,然后自动提取。接下来,我们将不同的质粒组合到AO原生质体中,合并不同组和顺序的基因,产生208个不同的菌株。