GST标签蛋白纯化技术原理及常见问题解析

如纯化后需将GST标签去除,可以采用柱上或柱下酶切的方式。如需柱上酶切,可以在标签蛋白与谷胱甘肽结合时加入针对于蛋白酶位点的特异性酶切酶进行切割。如需柱下酶切,则可在洗脱之后再加入酶切酶进行酶切。一般可以根据选择的表达载体使用PreScissionProtease、Thrombin、FactorXa三种酶进行切除。GST标签蛋白纯...

...赵超教授等:蛋白核小球藻胰脂肪酶抑制肽的分离纯化、鉴定及其...

福建农林大学食品科学学院的林娈、刘斌*、赵超*等以蛋白核小球藻为原料,通过前期酶解工艺优化制备小球藻蛋白酶解物,采用超滤和葡聚糖凝胶对其进行分离纯化,以胰脂肪酶活性抑制率为指标筛选具有降脂活性的肽组分(记为PES),以高糖饮食秀丽隐杆线虫为模型评价纯化肽PES的降脂效果。采用LC-MS/MS鉴定PES肽序列,结合分子对接...

胶原蛋白纯化工艺开发及优化

天然胶原蛋白主要来源于动物结缔组织,如皮肤、骨骼、肌腱等,也可以从水生生物如鱼鳞、鱼皮和鱼骨中提取,其常见提取方法包括热水浸提法、酸碱水解法、酶解法等。而利用DNA重组技术制备的,包含人胶原蛋白特定功能域的蛋白质称为重组胶原蛋白,它通常由选定的宿主细胞(如大肠杆菌、酵母、转基因动植物等)表达系统产生,具有...

《食品科学》:烟台大学孙蕾蕾副教授等:海参卵的活性物质研究进展

海参卵多糖的提取方法主要为化学水解法和蛋白酶解法,这两种方法都是先破坏多糖与蛋白质的结合,后利用溶解性加以分离。海参卵多糖的提取与分离纯化方法及其生物活性如表3所示。用稀碱或稀酸处理所获得的多糖成品中不含蛋白质,纯度高,但部分糖苷键可能因碱处理而断裂,或发生Walden转化或脱硫等多糖结构的改变,使其应用...

生物素化溶菌酶 (Biotin-Lysozyme)的特性与功能

生物素化溶菌酶结合了生物素和溶菌酶的双重特性,既具有靶向性又具有高效的水解能力。它可以在生物化学和分子生物学研究中发挥重要作用,如蛋白质的分离和纯化、细胞壁的裂解、生物分子的提取等。三、制备方法生物素化溶菌酶的制备通常通过生物素的特定基团与溶菌酶的氨基或羧基反应来实现。这种反应需要在温和的条件...

蛋白翻译后修饰(PTM)研究超全指南(下)

对PTM领域产生深远影响的一项新兴技术是遗传密码扩增,可以在不需要特定修饰酶的情况下,将PTM特异性地添加到靶蛋白上14(www.e993.com)2024年11月19日。拥有同源纯化的PTM蛋白形态对于结构研究、体外功能研究等至关重要。除了遗传密码扩增外,还有许多其他新兴技术,例如,核磁共振光谱法可用于蛋白质形式的位点特异性和结构洞察15,热解离测定法可用于...

Nature重磅综述 |关于RNA-seq,你想知道的都在这

移除rRNA有两种方法,一种是将rRNAs从总RNA中分离出来(所谓的pull-out法),另一种是使用RNAseH酶降解rRNA。这两种方法都需要使用序列特异性和物种特异性的、能与细胞质rRNA(5SrRNA,5.8SrRNA,18SrRNA和28SrRNA)和线粒体rRNA(12SrRNA和16SrRNA)互补的寡核苷酸探针。为了简化人类、大鼠、小鼠或细菌(...

...biotechnology】大语言模型生成跨不同家族的功能性蛋白质序列

4、ProGen在其他蛋白质系统中的适用性在跨越许多家族的通用蛋白质序列数据集上进行训练,ProGen设计来自任何家族的蛋白质,并提供相应的控制标签作为输入。为了在溶菌酶家族之外探索这种能力,评估了ProGen在生成和预测功能全长序列方面的表现,这些序列来自于其他方法已经应用过的家族:分支酸变位酶(CM)和苹果酸脱氢酶(MDH...

第三期新酶设计及酶技术应用专题培训班日程更新

《酶高产菌株的筛选与培养工艺研究》1.蛋白表达的底盘细胞选育及构建2.蛋白表达系统设计与优化3.蛋白合成工程菌构建及测试4.蛋白发酵生产工艺开发5.蛋白分离纯化工艺设计及放大叶健文,华南理工大学生物科学与工程学院,教授(博导)。研究方向包括细胞工厂构建与优化、生物传感、生物过程放大、生物材料、蛋...

内毒素的分离提取和纯化方法介绍

由Morrison等于1975年设计。水-丁醇法较酚法简便,温和,适用于提取大肠杆菌和沙门菌的LPS;所得制品含蛋白量约1%。但此方法仍存在一些不足,由于丁醇不能灭活制品中酶类,导致在制备过程和储存时,LipidA常发生降解。二、纯化(一)离子交换层析法利用阳离子树脂非特异性的吸附带负电荷LPS的性质,将LPS从流动相中...