指南共识丨纳米孔测序在病原微生物检测中的应用专家共识

高纯度DNA的A260/A280(260nm与280nm波长处的吸光度比值)应在1.7～1.9范围内,A260/A230(260nm与230nm波长处的吸光度比值)应>2.0。高纯度RNA的A260/A280应在1.8～2.0范围内,A260/A230应>2.0。应采用合适的方法检测核酸完整性,若核酸降解严重则需要重新提取。每次提取的核酸样本应使用Qubit荧光染料进行定量...

A260 /A280,A260 /A230 看不懂的进!

纯净的样品A260/A280大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物、盐(胍盐)等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。如果样品的A260/280=1.7,A260/230=0.5,那么就应该考虑污染原因不是胍盐残留,而...

土壤核酸提取老出问题?3 个难点一文攻克

腐殖质性质与DNA相似,是一种大分子亲水性阴离子聚合物,很容易与核酸一起被抽提出来,腐殖酸的残留会抑制DNA聚合酶的活性从而影响PCR的过程,进而影响后续的分子生物学实验和测序结果。如果洗脱的DNA溶液呈现黄色,或者A260/230偏低,通常就是腐殖质与DNA一起被洗脱下来。对于腐殖质、有机质含量高的样...

植物DNA的提取(CTAB法)

1ug/mL的DNA溶液A260=0.020,1ug/mL的RNA溶液或单链DNA的A260=0.022~0.024。1个A260相当于50ug/mL的DNA,40ug/mL的RNA。蛋白质的最大吸收在280nm,多糖的最大吸收在230nm。纯的DNA的A260/A280在1.8左右,纯的RNA的A260/A280在2.0左右。试剂和器材:(1)1MTris-cl(pH8.0)500ml:60.57gTris,pH8.0...

qPCR体系优化和常见问题分析

降解或不纯的RNA会限制逆转录反应的效率,降低产量。部分降解的RNA可能不能给出准确的基因表达结果。对于基因的定量,必须使用高质量的RNA,这意味着需要非常仔细地检查RNA的浓度和质量。可采用高分辨率琼脂糖凝胶检测核酸质量和分光光度法(A260/A280=1.8和A260/A230=2.0)检测核酸纯度和浓度。

常见溶剂中哪种才是最适宜的核酸稀释液?

A260/A280比值大于1.8表示样品DNA纯净,反之则存在蛋白质的污染,本次实验发现三种稀释液对核酸的A260/A280无显著影响;而A260/A230比值小于2.0则表明样品存在碳水化合物(糖类)、盐类或有机溶剂的污染,本次实验表明蒸馏水(灭菌注射用水)和DNA溶解液均会导致A260/A230比值小于2.0,因此核酸稀释时不建议采用上述两种稀释...