Nature Catalysis丨合成甲基营养大肠杆菌用于甲醇的生物转化

作者将含表达顺式乌头酸脱羧酶基因(cadA)的质粒转入MEcoli_ref_2生长到OD600值为46,然后诱导酶的表达来产生衣康酸,导致与摇瓶相比,衣康酸的浓度高大约7倍1.0??g??/l(7.7??mM),生产率提高了8倍15.0mgl-1·h-1(图4b,c)。图4高细胞密度培养提高衣康酸生产研究讨论从在生物反应器条件下观...

研究枯草芽孢杆菌L-天冬酰胺酶抑制薯片中丙烯酰胺的应用

通过确定谷氨酸脱氢酶(GLDH)形成的氨量,来测量酶活性,反应混合物含有100mmol/l磷酸钾缓冲液(pH8.0),30mmol/l,l-Asn和最终体积为1ml的酶,在10°C下进行20-30分钟后,通过煮沸3分钟终止反应。将反应混合物(50–100μl)转移到含有100mmol/lTris–HCl缓冲液(pH8.0)、2.4mmol/lNADH、100mmol/l...

重组质粒的转化、筛选和鉴定操作

质粒pUC18和pBR322分别用PstI和EcoRI双酶切,将酶切产物按照1:1的比例混合,使用T4DNA连接酶连接,构建成重组质粒。2、制备感受态大肠杆菌细胞收集大肠杆菌细胞,采用CaCl2处理,制备成感受态细胞。3、重组子的转化将构建的重组质粒加入到制备的感受态细胞悬浮液中,电击法将重组质粒转化到宿主细胞中。4、重组...

医药行业病毒载体专题报告:CGT关键原料,关注外包生产

质粒是病毒载体生产的关键原料,涉及病毒载体的实验室研究、药物临床试验的质粒需求量一般在毫克级,商业化生产的需求量则为克级。以AAV载体生产为例,根据文献研究,在最佳质粒—宿主细胞比例下,1.6μg的质粒在悬浮反应体系中生产的AAV载体滴度最高达到了7.64*109vg/ml(gc/ml等同于vg/ml,即Vector...

细胞与基因治疗行业深度报告:加速崛起的黄金赛道

质粒由于结构简单,且理化性质相似,因此构建一个平台化的生产和纯化工艺相对简单。质粒生产周期较短,上游发酵和下游纯化罐装工艺约需6天,但质粒的质量控制约需30天(主要对支原体等检测周期较长),质粒生产的年产能可达100批次。综上,质粒生产的工艺优化对于提升质粒的产量和质量具有极大的意义,在大肠杆菌大规模...

猪伪狂犬病毒gB基因在大肠杆菌中的分段表达

本研究表明,用大肠杆菌表达的不同片段的gB抗原均能与猪伪狂犬阳性血清反应(www.e993.com)2024年11月19日。以gB-4和gB-5重组抗原建立的ELISA方法与IDEXX公司的gBELISA试剂盒符合率均为81.8%。但是限于检测样品的数量较少,抗原评价可能存在差异。仍需扩大检测样品数量,进一步评估鉴定。

史上最全的30个生物实验技术及原理

十二、大肠杆菌感受态细胞(E.coliDH5α)制备1、前夜接种受体菌(DH5??或DH10B),挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜(约16小时);2、取1ml过夜培养物转接于100mlLB培养基中,在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时(250-300rpm);3、将0.1MCaCl2溶液置于冰上预冷;以下步骤需在超净工作台和冰上...

综述| NAT REV MICROBIOL:微生物群落中的水平基因转移分析

如前所述,多项研究揭示了通过使用荧光报告基因进行极其广泛原位转移的可能性,另一项研究通过供体大肠杆菌菌株将小鼠微生物组的GFP整合至能感染多种宿主的质粒,发现这种质粒能够在不同门物种之间进行传播。而且,与在体外将报告菌株引入同种微生物组样本相比,这种情况在小鼠肠道内更明显。体外土壤群落中的类似实验表明,...

【中银医药】诺唯赞(688105.SH):上游试剂端“强内核”带来高延展...

公司规模化多系统重组蛋白制备平台已成功表达了数千种不同的重组蛋白,已保藏表达宿主40余种、特有质粒百余种,大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞表达系统可实现超过100L的高密度发酵。平台已开发了上百种酶原料的分离纯化工艺,大部分均已实现规模化量产,包括聚合酶、逆转录酶、连接酶等多种分子生物学工具酶,单批次产能...

肠道核心菌属——双歧杆菌,你最好拥有它

在一项研究中,从无菌场所分离出的15种推定的双歧杆菌分离株或大量存在的双歧杆菌被鉴定到物种水平,鉴定出四种:A.omnicolens、B.breve、B.longum、B.scardovii,来自胃肠道或泌尿生殖道,B.breve来自血液。Scardoviawiggsiae是一种新物种,与严重的幼儿龋齿有关。