测定蛋白质等电点:了解分析原理与实验方法的必备指南
等电点的定义:等电点是蛋白质溶液中净电荷为零的pH值,即带正电荷的氨基酸残基和带负电荷的氨基酸残基在该pH值下几乎相等。二、测定蛋白质等电点的方法等电聚焦电泳(IEF):利用电场将蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中分离,根据其在电场中迁移的速率确定等电点。等电点电泳(IPG):使用具有梯度pH值的聚丙烯酰胺凝胶,将...
原理与应用:深入了解蛋白质等电点测定的科学价值
1.等电聚焦电泳:该方法利用电场在pH梯度凝胶中驱动蛋白质分子的迁移,最终在等电点处停止迁移。通过测定迁移距离或使用荧光染料可确定蛋白质的等电点。2.电化学法:该方法基于电化学分析技术,通过测定蛋白质在电极表面的电位变化来确定等电点。3.理论计算法:该方法基于蛋白质氨基酸序列中各个氨基酸的pKa值,通过计算...
《食品科学》:湖北工业大学周彬教授等:pH值偏移对麦谷蛋白结构的...
这可能是因为pH值偏移处理使Glu中的谷氨酰胺发生脱酰胺转换为谷氨酸,增加了蛋白质侧链羧基含量,增加相同条件下Glu的带电量,增大分子间静电斥力,降低氢键相互作用,抑制蛋白质分子的聚集行为,从而致使Glu粒径减小。此外,碱偏移处理效果优于酸偏移处理。一般来说粒径越小的蛋白质聚集体越容易溶解,较小的蛋白质聚集体...
《食品科学》:宁夏大学罗瑞明教授等:氯化钙对宰后成熟期间滩羊肉...
并测定宰后成熟期间滩羊肉的pH值、糖原含量、乳酸含量、肉色、保水性、剪切力和肌原纤维小片化指数(MFI)值,阐明滩羊肉成熟期间糖酵解程度与能量水平的关系,进一步探究宰后成熟期间滩羊肉能量水平的变化对肉品质的影响。1滩羊肉成熟期间PFKM蛋白的表达情况PFKM蛋白在成熟0、4、8d的蛋白印迹结果如图1所示。处理...
蛋白形成包涵体问题汇总
一般含半胱氨酸越多的重组蛋白越易形成包涵体,而脯氨酸的含量明显与包涵体的形成呈正相关。03.所处的环境发酵温度高或胞内pH接近蛋白的等电点时容易形成包涵体。04.蛋白的来源重组蛋白是大肠杆菌的异源蛋白,由于缺乏真核生物蛋白翻译后修饰所需酶类,致使中间体大量积累,容易形成包涵体沉淀。因此有人采用共表达...
《食品科学》:哈尔滨商业大学朱秀清教授等:大豆蛋白组分制备及其...
11S球蛋白是大豆中含量最多的球蛋白,主要为含硫氨基酸较多的大豆球蛋白,分子质量介于320~375kDa之间,其结构在中性条件下为由5种亚基构成的空心六聚体,每种亚基由一条酸性多肽和一条碱性多肽通过二硫键连接形成,等电点处pH值约为5.8(www.e993.com)2024年10月17日。7S球蛋白主要由β-大豆伴球蛋白、γ-大豆伴球蛋白和碱性7S球蛋白组成。其...
等电聚焦(Isoelectric focusing,IEF)电泳法测定蛋白质的等电点
当进行聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳时,凝胶柱内即产生pH梯度,当蛋白质样品电泳到凝胶柱内某一部位,而此部位的pH值正好等于该蛋白质的等电点时,该蛋白质即聚焦形成一条区带,只要测出此区带所处部位的pH值,即为其等电点。电泳时间越长,蛋白质聚焦的区带就越集中,越狭窄,因而提高了分辨率。这是等电聚焦的一大...
蛋白质分离和纯化的原理
实验原理:利用蛋白质在等电点时溶解度最低而各种蛋白质又具有不同等电点的特点进行分离的方法。在等电点时,蛋白质分子以两性离子形式存在,其分子净电荷为零(即正负电荷相等),此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥,分子相互之间的作用力减弱,其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀,所以蛋白质在等电点时...
电泳技术Techniques in Electrophoresis
1、电泳介质pH值的影响对于蛋白质和氨基酸等两性分子,电泳介质的pH值决定了它们所带净电荷性质和多少。pH值小于等电点,分子带正电荷,向负极泳动,如果pH值大于等电点,分子带负电荷,向正极泳动。pH值偏离等电点越远,分子所带净电荷越多,其泳动速度越快。当缓冲液pH值等于其等电点时,分子处于等电状态,...
【汇总】你想知道的蛋白提取纯化知识全在这了
蛋白质,酶是具有等电点的两性电解质,提取液的pH值应选择在偏离等电点两侧的pH范围内。用稀酸或稀碱提取时,应防止过酸或过碱而引起蛋白质可解离基团发生变化,从而导致蛋白质构象的不可逆变化,一般来说,碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取,而酸性蛋白质用偏碱性的提取液。