如何选择WB蛋白电泳封闭液?
1、脱脂奶粉:便宜,易于获得,适用范围相对BSA(牛血清白蛋白)窄,由于牛奶中含有生物素,如正在使用抗生物素蛋白-生物素检测系统,则脱脂奶粉不适用,同时也不适用于磷酸化蛋白的检测。2、BSA:成分单一,适用于多数情况,但价格较高,且可能在提纯过程中混有IgG(免疫球蛋白G)或其他血清蛋白,增加非特异性背景,不可封闭Fc...
Adv Sci | 中国医科大学揭示虫草素靶向HKII和PDK2调节小胶质细胞...
蛋白质质谱分析显示,己糖激酶ⅱ(HKII)和丙酮酸脱氢酶激酶2(PDK2)分别是与糖酵解和OXPHOS相关的最富集的推定靶点,这是B-COR治疗所特有的(图5F,G)。链霉亲和素-b-COR复合物进一步的蛋白电泳显示,b-COR沉淀的裂解物与HKII和PDK2结合,而不是HKI和PDK1(图5H,I),这表明HKII和PDK2是COR的特异性靶点,分别有...
激酶谱筛选方法|激酶谱测试服务|激酶谱定制实验|416激酶谱服务
MobilityShiftAssay迁移率偏移测定通过测量激酶反应中的非磷酸化和磷酸化底物直接监测磷酸化。根据选择的靶激酶评估化合物的效力和选择性。激酶反应后,部分底物被激酶加上磷酸基团成为产物,带有荧光标记的多肽底物和反应产物之间相差3个电荷,当进入毛细管电泳后,由于两者所携带的电荷不同而达到分离。当运行基于芯片的...
Western blot整膜和未裁剪膜长什么样还不清楚?
但在胞质分裂、内吞或应激等进程中,细胞骨架重组信号刺激纤丝状肌动蛋白的片段化和解聚;在原发性乳腺癌细胞中,肌动蛋白被高度磷酸化;在凋亡条件下,心肌和骨骼肌中均能观察到β-Actin的清除,因此,在相关研究中需要谨慎选择。(3)β-Tubulin:是Tubulin(微管蛋白)家族中的一员,微管蛋白在物种间高度保守,不同亚型...
多肽分子量测定:解析生物药物中的微观巨变
2.蛋白质修饰研究:多肽分子量测定可用于研究蛋白质的修饰,如糖基化、磷酸化和乙酰化等。通过测定修饰后的多肽分子量,可以揭示修饰对蛋白质结构和功能的影响,从而深入了解生物学过程和疾病机制。3.蛋白质降解研究:多肽分子量测定可用于监测蛋白质的降解和剪切过程。通过测定降解产物的分子量变化,可以评估蛋白质的...
解析R848结合流感疫苗的偶联剂依赖效应:对APC激活及体内免疫原性...
5.与IPR8-SM(κ)4-R848相比,IPR8-GMBS-R848促进I-αB磷酸化增加研究人员假设观察到的这些疫苗刺激活性的差异是由于不同的TLR信号所致(www.e993.com)2024年10月19日。由于人类moDC优先对TLR8激动剂产生反应,研究人员预计疫苗将通过这些细胞中的TLR8/MyD88通路发出信号。TLR8信号激活多种转录因子,包括核因子-κB,从而产生促炎细胞因子。因此...
磷酸化蛋白组学分析:破解细胞信号传导的磷酸化调控机制
其中,磷酸化调控机制在细胞信号传导中起着至关重要的作用。磷酸化是指将磷酸基团(磷酸化基团)添加到蛋白质分子上,从而改变其结构和功能。磷酸化蛋白组学分析是一种用于研究细胞信号传导的重要工具,通过测定蛋白质的磷酸化状态,可以揭示细胞信号传导的磷酸化调控机制。
磷酸化蛋白质的常用检测方法
蛋白质磷酸化可以通过识别电泳凝胶上的同位素蛋白点来检测。用32P同位素放射性标记法,即体内代谢培养用32P同位素放射性标记磷酸盐作为磷酸基团供体,经过磷酸化酶促反应,带有32P同位素放射性标记的磷酸基团则转移到相应的反应蛋白上,通过凝胶电泳分离,可以用放射自显影或磷储屏检测磷酸化蛋白质。但放射性标记只能在细胞中应...
天能VE-586丨Western Blot蛋白免疫印迹常见问题
脱脂奶粉含有酪蛋白,该蛋白本身就是一种磷酸化蛋白,会结合磷酸化特异性抗体而易产生高背景。使用BSA代替奶粉作为封闭剂。8)未结合蛋白质洗涤不充分——增加洗涤次数。9)膜的选择导致的高背景——NC膜比PVDF膜背景低。08Westernblot结果中杂带较多可能的原因及建议目的蛋白有多个修饰位点(...
磷酸化叉头框O4型在H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用
将H9c2心肌细胞接种于中号培养皿,每组重复3次,进行相应H/R处理后提取蛋白,并用BCA试剂盒检测蛋白浓度,每组各取30μg进行SDS??PAGE电泳分离蛋白。将蛋白转移到偏二氟乙烯膜,并用5%脱脂牛奶(生产批号:S30865,上海源叶生物科技有限公司)封闭2h,再用对应分子的抗体(抗FoxO4抗体、抗磷酸化FoxO4抗体、抗Bim抗体、抗...