过年亲手放过的烟花,在师妹的 qPCR 扩增曲线上复现了
正常的qPCR扩增曲线应为S型,理想的CT值范围在20~30。若出现CT值偏大、无平台期或平台期下降等异常情况,可尝试以下调整:●若CT值偏大,可能是模板量不足或基因表达丰度低,建议增加模板量并观察CT值是否按预期倍数减少。●考虑qPCR反应条件或引物设计可能不合适,导致扩增效率降低。此时,...
qPCR 曲线「丑」到拿不出手!除了引物,这些问题也要注意
Ct值过低:可能是模板浓度高,引物设计不合适。因此应减少模板量或稀释cDNA,优化程序避免非特异性扩增。CT值重复性差:仪器、试剂、耗材、实验操作细节等众多因素,具体问题具体分析。3.qPCR扩增曲线异常:正常扩增曲线应呈平滑S型。常见异常包括扩增曲线锯齿状(RNA浓度低或体系含有杂质);无法到达平台期(...
2021分子诊断行业深度报告!|基因|诊断|检测|技术|肿瘤|-健康界
和qPCR相比,dPCR优势包括:灵敏度高(可以达到单个核酸分子)、无需标准曲线或参照基因进行对比来测量核酸量、适合环境复杂样品的检测、能够有效区分浓度差异微小的样品。dPCR在国内尚处于起步阶段,目前仅有南京科维思生物的HER2基因扩增检测试剂盒(数字PCR法)获批,在肿瘤伴随诊断、肿瘤早筛、传染病检测、NIPT...
拜qPCR 所赐,我成功跻身实验室第一显眼包
A1:扩增曲线存在问题时,首先应确认基线校正或ROX校正前的原始曲线,扩增曲线的荧光信号值低多数是由于背景荧光信号值过高造成的。使用嵌合荧光法进行检测时,背景荧光信号偏高大多数是由于模板量过高,染料嵌入到初始模板DNA中发出荧光造成的。使用荧光探针法进行检测时,背景荧光信号偏高大多是由于设计的探针质量差使淬...
PCR异常扩增曲线原因及案例分析
这个跟引物以及反应的体系温度有关系,如果说没有峰值或者杂乱无章,很有可能是引物的问题,建议重新设计引物。有时候有小的峰,可以通过优化反应条件,比如退火温度的优化来消除这个影响。常见异常曲线原因1确认软件设置是否正确对照试剂盒说明书,检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的...
大规模新冠核酸筛查中出现的异常扩增曲线分析
原因分析:仪器的自动基线设定为6-12循环,因样本病毒核酸载量高,扩增曲线起跳早,位于或早于基线循环处,导致曲线异常(www.e993.com)2024年9月9日。03解决方案:该类型曲线需手动调整基线范围,将基线设定前移至合适循环,重新分析。03小“S”型01曲线特点:曲线呈现出不典型的“S”型,有极短的对数扩增上升期,后进入平台期,荧光强度...
小曲线大学问-新冠核酸异常扩增曲线知多少?
内标扩增曲线异常正常的内标扩增曲线是实验有效性的基础,可反映样本质量、抽提和扩增效率。曲线特点:类型一某标本内标无S型扩增曲线。类型二外源性内标呈离散型曲线。原因分析:a)标本采样欠佳,没有刮取到足够的鼻咽部细胞。b)标本保存不当,核酸降解。
如何解析新冠核酸检测中的异常扩增曲线?
原因分析:(1)仪器不稳定导致的扩增曲线异常(也可能突然停电或者电压不稳)。(2)尖峰向下,可能是卤素灯老化所致发射光源不稳定(指卤钨灯光源的激发器)。(3)尖峰向上,考虑仪器或者孔位问题,还要考虑反应体系是否存有气泡。解决方案:(1)检查仪器性能,检查实验室电压情况。
新冠内标扩增反应曲线呈锯齿状,原因是...
1.扩增曲线不光滑如图8。主要有两个原因:(1)扩增信号太弱,经系统矫正后,就会产生不平滑的线,可以通过提高模板浓度重复实验。(2)仪器本身的问题,可能在扩增过程中仪器出现波动或者检测孔本身出现异常。图82.扩增曲线呈锯齿状且不连续如图9。原因是典型的ROX添加不当导致的异常结果。
检验人,那些令人犯晕的PCR异常曲线这里都讲了!
PCR实验结果中有曲线出现末尾起跳但是没有完整扩增的现象。原因分析:(1)阴参曲线末尾起跳,通常表示存在污染;(2)复检样本,排除非特异性扩增的可能性;(3)正常样本也可存在曲线末尾起跳,表示样本浓度低或者加样量不准确。解决方案:排除是否存在污染;...