探讨如何选择适合的热启动Taq酶
Taq酶可以催化5'至3'方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合,是最常用的DNA聚合酶之一。它的最大特点就是可以在高温下工作,95℃孵育时的半衰期大于40分钟,被鉴定为能够承受PCR期间所需蛋白质变性条件(高温)的酶。传统PCR中,反应体系的各组分(Taq酶、dNTP、引物等)会一并加入并进入循环,在反应温度由室温升高至9...
知识分享|一文了解实时荧光定量PCR(qPCR)技术的原理与分类
1.DNA染料法可检测所有双链DNA扩增产物,包括非特异反应产物,如引物二聚体,不需要探针,因此减少了实验设计及运转成本,适合于大量基因的分析,简单易用;缺点是易产生假阳性现象。2.Taqman探针法对于不同的靶序列需要合成不同的探针,原料成本较高,仅检测特异性扩增产物,特异性优于DNA染料法,更适用于病原体检测。
MRD 检测是否有必要做、怎么做?从临床研究到诊疗应用
在实体瘤领域,通过检测肿瘤释放到血液中的循环肿瘤DNA(ctDNA),来判断体内是否存在微小残留病灶,可以帮助医生更准确地评估患者的预后情况。2024年5月1日,JCOPrecisionOncology发表了EBLIS研究长达12年的最终随访结果,也是迄今为止规模最大、ctDNA随访时间最长的乳腺癌MRD队列研究[1]。该研究共纳入1...
PCR、qPCR、dPCR、RT – PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR;傻傻分不清?
②退火(复性):当温度降低时,引物与模板DNA中互补的区域结合成杂交分子。退火温度通常低于引物本身的变性温度,一般在50℃至65℃之间,持续30秒至1分钟,确保引物与模板DNA特异性结合。;③延伸(Extension):在DNA聚合酶、dNTPs(四种脱氧核糖核苷三磷酸)和Mg2+等存在下,DNA聚合酶催化引物按照5′→3′方向延伸,合成出...
氨基酸深度研究:助益粮食安全,借力合成生物
过去数年,DNA合成技术在合成长度、合成通量等方面不断进步,目前寡核苷酸链合成通量可达到百万条级,合成成本降低约3个数量级。基因编辑技术方面,2012年开始科学家利用CRISPR/Cas可编程和精准切割等特点陆续发展了一系列基因组编辑工具,由于其方便、快捷、高效、成本低、难度小等特点,为动植物和微生物基因组编辑提供了强...
国自然撰写:经典分子机制研究(一)
它是能直接或间接地识别或结合在顺式作用元件8~12bp核心序列上,参与调控靶基因转录效率的一组蛋白质(www.e993.com)2024年10月16日。这类DNA结合蛋白有多种,能特异性识别这类蛋白的序列也有多种,正是不同的DNA结合蛋白与不同的识别序列之间的空间结构上的相互作用,以及蛋白质与蛋白质之间的相互作用构成了复杂的基因转录调控机制的...
指南共识丨纳米孔测序在病原微生物检测中的应用专家共识
(1)血液样本通常于肘静脉采集3~5mL血液至乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管或游离DNA保存管中。采血时皮肤需彻底消毒,切忌在静脉滴注抗菌药物的静脉处采血,除非怀疑有导管相关的血流感染。(2)骨髓样本一般通过骨髓穿刺取得,临床医师需要在严格无菌操作下,抽取患者1~2mL骨髓样本至EDTA抗凝管或游离DNA保存管中。
病原靶向测序(tNGS)——一种快速崛起的感染性疾病诊断方法
1.价格更便宜由于tNGS无需去人源化,直接对靶向基因进行测序,所需测序数据量较小,相比较而言测序更快,价格更便宜。目前市场上的mNGS通常在大几千块(DNA+RNA),而tNGS价格在2000块左右,甚至有公司的小panel靶向产品价格降到了千元以下,这种价格不仅与mNGS相比有优势,和多重荧光定量PCR相比,价格贵的不多,但能做...
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8清华大学孙前文团队在NatureCommunications在线发表题为“PrimasepromotesthecompetitionbetweentranscriptionandreplicationonthesametemplatestrandresultinginDNAdamage”的研究论文,该研究发现引物酶促进同一模板链上转录和复制之间的竞争,导致DNA损伤。
癌症疫苗的最新进展:挑战、成果和前景
STING是一种镶嵌在内质网的跨膜蛋白,在细胞DNA的反应下激活I型IFN。天然和合成的环二磷酸鸟苷和二核苷酸衍生物是主要的STING激动剂,已在小鼠中显示出抗肿瘤活性。STING激活可诱导T细胞凋亡,因为T细胞的STING表达水平最高,而巨噬细胞和DCs并未显示这些结果。为了用于癌症疫苗,STING激动剂需要作为佐剂或与仅针对小鼠...