重组蛋白/细胞因子的精准选择和正确使用,你值得拥有!
蛋白标签(proteintag)是指利用DNA体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白,以便于目的蛋白的表达、纯化、检测和示踪等。常用的蛋白标签有His/6xHis、Flag、GST、C-Myc、HA、GFP、mCherry、C-Fc。以IL10RB为例,优宁维可提供多种标签重组蛋白:表2:重组蛋白各种标签对比关于标签的位置,蛋白标签...
Science:青蒿素通过介导 LONP1-CYP11A1 相互作用改善多囊卵巢综合...
(E到G)SPR测定显示纯化的LONP1蛋白酶结构域分别与ATM(E)、SM934(F)或ATS(G)之间的相互作用。(H)将全长LONP1或其蛋白水解结构域转染至稳定表达CYP11A1-Flag的HEK293T细胞中。用SM934(5μM)处理24小时后,使用Flag标签进行co-IP,然后使用Myc抗体通过蛋白质印迹检测相互作用的LONP1。(I)WTLONP1或突变型LON...
J Virol. | OAS1通过募集TRIM21降解病毒主要衣壳蛋白来抑制ASFV复制
为了确定TRIM21是否参与OAS1诱导的P72降解,将pFlag-OAS1、pHis-P72和pMyc-TRIM21共转染HEK-293T细胞。Co-IP和Westernblotting表明ASFVP72能与OAS1和TRIM21相互作用,但TRIM21只有在P72存在的情况下才能与OAS1相互作用(图7C和D)。随后,纯化His-P72、Myc-TRIM21和GST-OAS1蛋白进行GST下拉实验。Westernblotting...
免纯化亲和力检测 | Monolith 助力膀胱癌发生发展机制研究
图2:MST技术检测293T细胞中过表达GFP-POLD1的裂解物与MYC-MB1(WT)肽的结合亲和力技术优势Monolith系列仪器在检测分子间相互作用时,可以直接检测细胞裂解液中的靶标蛋白于配体的亲和力,无需纯化蛋白。这种方法特别适合检测难纯化,或纯化后不稳定的蛋白样品,为科研人员节省蛋白纯化的时间,减少工作量。
重磅!NanoTemper 年度MST技术用户案例精选
因此研究团队合成了MB1肽段,然后使用MST技术检测了POLD1与MB1肽之间的亲和力,并与FBXW7α作对比,证明POLD1对MB1的亲和力比FBXW7α强,因此它可以与FBXW7α竞争结合MYC(图8)。在这个实验中,POLD1和FBXW7α也都是与GFP融合表达在293T细胞,直接使用细胞裂解液作为target进行检测,无需纯化蛋白。
蛋白表达纯化时如何选择标签?
3c-MycMyc标签，包含人类原癌基因Myc的10个氨基酸区段，序列为EQKLISEEDL，可融合到目标蛋白N端或者C端(www.e993.com)2024年11月13日。由于可获得高特异性抗Myc单克隆抗体，因此在Western印迹，免疫荧光和免疫沉淀实验中被广泛使用，但是很少用于蛋白质纯化。目前，市场上已有很多可供选择的商业化c-Myc抗体。4Flag,3×FlagFLAG标签，是目标蛋白...
【学术前沿】Dev Cell丨张宏团队揭示细胞内天然蛋白以表面活性剂...
综上,本研究表明转录因子凝聚体的界面张力与其转录活性密切相关,细胞中的天然蛋白质可能以表面活性剂方式调控转录因子凝聚体的界面张力及转录活性,进而调控相关通路的活性。图3MLX、IPMK和MYC以协同表面活性剂方式调控TFEB凝聚体的转录活性中国科学院生物物理研究所张宏实验室王峥副研究员是该论文通讯作者和第一作者...
植物中验证蛋白相互作用的Pull-down和Co-IP详细技术方案
Pull-down与Co-IP的原理类似,均是利用亲和配体捕获互作蛋白。不同之处在于Pull-down利用1个纯化且含有标签的蛋白作为诱饵来结合互作蛋白,通常用来证明蛋白之间直接的相互作用;Co-IP则采用固定的抗体捕获互作蛋白,用来证明2个蛋白之间的相互作用,但是不排除通过第3个蛋白介导的间接互作。下面我们将详细介绍GST标...
干货| Flag还是HA?一文搞定你的表位标签选择困难症!
Myc序列/长度:CEQKLISEEDL(11AA)基质:mAb的抗Myc表位洗脱条件:低pH特点来源于人类原癌基因Myc,避免用于人源细胞相关实验。适用场景一般不用于蛋白纯化,适用于WB、IP、IF、ELISA、FCV5序列/长度:GKPIPNPLLGLDST(14AA)基质:mAb的抗V5表位...
聚焦药靶:穿胶水的“恶魔”,靶向蛋白降解剂中分子胶的最新进展
MonteRosa于2021年6月份在纳斯达克上市,通过蛋白降解平台QuEEN分析靶标蛋白分子表面特征,是第一家专注于分子胶开发的上市公司。根据近期发布的第三季度季报,其口服分子胶GSPT1降解剂MRT-2359已经启动IND研究,并期待在2022年年中向FDA提交IND,它的适应症是过度表达MYC家族基因的一类癌症。MYC转录因子是最常发生突变、易...