重组蛋白/细胞因子的精准选择和正确使用,你值得拥有!

蛋白标签(proteintag)是指利用DNA体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白,以便于目的蛋白的表达、纯化、检测和示踪等。常用的蛋白标签有His/6xHis、Flag、GST、C-Myc、HA、GFP、mCherry、C-Fc。以IL10RB为例,优宁维可提供多种标签重组蛋白:表2:重组蛋白各种标签对比关于标签的位置,蛋白标签...

干货分享:蛋白质融合表达的标签及切割研究汇总

TALON使得标签蛋白在温和条件下洗脱,已有报导与Ni2+-NTA树脂相比,其非特异性蛋白结合更少,从而达到更高的洗脱产物纯度。一种酶制剂通过SDS-PAGE鉴定的纯度高于95%.(3)谷胱甘肽S-转移酶-标签1988年首次描述了融合有谷胱甘肽S-转移酶(GST)的多肽的一步纯化。来自日本血吸虫(schistosomajaponicum),26-kDa的GST被...

探索蛋白质相互作用的奥秘:GST-Pulldown质谱的应用

GST-Pulldown质谱技术基于葡萄糖转移酶(glutathione-S-transferase,GST)与其结合蛋白的亲和性。研究人员将GST标签融合到目标蛋白中,并通过其与GST结合的能力来寻找与该蛋白相互作用的其他蛋白质。该方法的基本步骤包括蛋白表达、融合蛋白的纯化、与目标蛋白的相互作用、GST蛋白复合物的富集以及质谱分析。二、应用领域1....

分子互作|蛋白与蛋白、核酸、小分子互作检测技术介绍、应用及资料...

1、GST标签蛋白表达和纯化;2、GST标签蛋白偶联GSH琼脂糖珠或者磁珠;3、和细胞裂解液或者另一个蛋白共同孵育;4、清洗和洗脱:清洗掉非结合蛋白,洗脱目标蛋白;5、蛋白检测和分析:可以用WB或者质谱进行检测;??应用1、确定两种蛋白是否有相互作用,一般在后面接WB实验;2、确定两个蛋白的结合的结构域或者位...

J Virol. | CP204L作为非洲猪瘟病毒的一个多功能蛋白,与同型融合...

为了深入了解CP204L在ASFV感染和未感染细胞中的宿主蛋白相互作用组,文章采用了亲和标签纯化-质谱(AP-MS)方法(图1A)。首先,用感染的细胞进行AP-MS实验,以鉴定CP204L与其他病毒蛋白以及与宿主蛋白的相互作用。使用具有C-末端绿色荧光蛋白(GFP)标签的高毒力ASFV格鲁吉亚株的CP204L作为诱饵蛋白。该蛋白在野猪...

从GST Pull Down到疾病治疗:生物药物研发中的新突

GSTPullDown技术是一种基于蛋白质相互作用的实验方法,其中GST(谷胱甘肽-S-转移酶)标签被用于特异性地捕获靶蛋白(www.e993.com)2024年11月13日。该技术利用GST标签与靶蛋白的非共价相互作用,通过亲和纯化的方法富集特定的蛋白质复合物。具体步骤包括:首先,目标蛋白质被融合到GST标签上,并通过亲和层析纯化方法与其他蛋白质相互作用。然后,使用GST结...

亲和层析填料的种类及其应用

GST亲和层析纯化蛋白的条件温和，可以保证蛋白的活性。3.MBP-tag亲和层析介质麦芽糖结合蛋白（MBP）有42.5KD大小，不含半胱氨酸（Cys），作为融合蛋白的标签，通常放在N端在大肠杆菌中进行表达。MBP能促进融合蛋白的可溶性表达[9]，尤其对于难表达的真核细胞蛋白，膜蛋白病毒蛋白有很好的促溶表达能力，MBP...

博格隆亲和层析填料选择的关键因素与策略

除镍之外,金属螯合亲和层析介质还可鳌合Cu2+,Zn2+,Co2+等离子纯化含组氨酸、半胱氨酸和色氨酸侧链的蛋白质和多肽。GST标签有利于蛋白质的可溶表达和活性维持,利用填料上还原型谷胱甘肽配基与含有谷胱甘肽S转移酶的融合蛋白特异性结合的特性可对GST标签蛋白进行分离纯化。26KDa的GST标签后续需内切酶切除,切除标签后...

蛋白表达纯化时如何选择标签?

3c-MycMyc标签，包含人类原癌基因Myc的10个氨基酸区段，序列为EQKLISEEDL，可融合到目标蛋白N端或者C端。由于可获得高特异性抗Myc单克隆抗体，因此在Western印迹，免疫荧光和免疫沉淀实验中被广泛使用，但是很少用于蛋白质纯化。目前，市场上已有很多可供选择的商业化c-Myc抗体。4Flag,3×FlagFLAG标签，是目标蛋白...

纯化GST标签蛋白得靠它

纯化GST标签蛋白得靠它亲和层析是利用生物大分子与某些相对应的专一分子特异识别和可逆结合的特性而建立起来的一种分离生物大分子的层析方法。谷胱甘肽-S-转移酶(GST)是一种亲和标签,用GST标记真核蛋白可增强融合蛋白的溶解性。此外,带有GST标签的蛋白可以在细菌中高水平表达,但可能会由于蛋白聚集而形成包涵体。