??研究蛋白质热稳定性的几种方法
2024年8月12日 - 仪器信息网
蛋白质加热变性后疏水基团暴露,疏水基团与亲和性染料结合产生荧光信号,检测荧光强度变化测定蛋白质的Tm值。特点:借助荧光定量PCR适用于高通量筛选,信号强度可控,灵敏度和准确性都较高。但添加的外源染料可能会对蛋白质结构和功能产生影响,且操作较复杂,不适用于所有蛋白研究。比如做膜蛋白研究时,溶液环境中需要添加双亲...
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生物分析专栏 | 寡核苷酸药物的药代动力学及其生物分析
2022年12月22日 - 网易
固相萃取法通常采用弱阴离子交换(WAX,如ClarityOTXcartridge)或者亲水-亲脂填料(如HLB),前者利用酸保留、碱洗脱原理,提取效率较高;后者基于反相离子对色谱的原理。通常,寡核苷酸样品上样是在pH值为5.5的缓冲液条件下,先对药物进行强保留。采用相对强的溶剂,如1:1的pH值为5.5的缓冲液和乙腈或者甲醇去除其它...
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普通PCR技术和数字PCR技术,什么区别?
2021年5月13日 - 健康界
对策:①提高预变性温度或变性时间,使双链完全打开;②TD-PCR(梯度PCR);③换用热启动酶或mix;④增加DMSO等共溶剂,协助DNA变性,降低引物Tm值,提高产物扩增特异性。问题4:产物在凝胶上呈Smear状态原因:①模板不纯;②Buffer不合适;③退火温度偏低;④酶量过多;⑤dNTPs、Mg2+浓度偏高。对策:①...
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分子杂交(molecular hybridization)的概念和基本原理
2010年1月31日 - 生物探索
随着溶剂内离子强度上升,Tm值也随着增大。2)内部因素:DNA的碱基比例、DNA的均一性;在相同条件下,DNA内G-C配对含量高,其Tm值也高。6、DNA中的GC含量与Tm值关系:Tm=69.3+0.41×%(G+C)对于小于20bp的寡核苷酸,Tm=4(G+C)+2(A+T)实验表明DNA分子中(G+C)克分子含量百分比的大小与Tm值...
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