...安徽工程大学张琴教授等:过表达去饱和酶基因对大肠杆菌脂肪酸...

重组表达质粒pET-28a-de1、pET-28a-de2、pET-28a-de抽提纯化,分别采用限制性内切酶EcoRI/XhoI、BamHI/XhoI、BamHI/XhoI双酶切,琼脂糖凝胶电泳结果显示,各重组表达质粒酶切后均产生两条带(图2),其中大片段均与质粒pET-28a单酶切片段长度一致,小片段分别与de1、de2、de基因的目的片段长度一致,进一...

和元生物获得发明专利授权:“一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定...

具体步骤如下:1)菌体重悬,所述重悬液含二糖类化学物质;2)碱裂解;3)中和;4)澄清;5)浓缩换液;6)分子筛层析;7)制剂换液。本发明的工艺简便,通过在菌体重悬液中添加一定浓度的二糖(如蔗糖、海藻糖等),保护大肠杆菌碱裂解过程中的超螺旋质粒,进而简化下游层析纯化工艺,并提高质粒回收率,方便快捷,适于推广应用。

《食品科学》:南阳师范学院唐存多副教授等:大肠杆菌L-苏氨酸脱氢...

本研究从E.coli中克隆出L-TDH的基因片段,再借助pACYCDuet-1表达质粒在E.coliBL21(DE3)中实现了高水平的可溶性表达,酶活力测定结果表明,E.coliBL21(DE3)/pACYCDuet-1-Ectdh发酵液中L-TDH活力可达19.13IU/mL,纯化后重组L-TDH的比活力为12.77IU/mg。与已报道文献相比,本研究表达水平和比活力均较高,...

颠覆大肠杆菌地位?创新微生物引领合成生物实验新潮流

为了生成大量的蛋白质变体以供测试,研究者经常将这些质粒导入大肠杆菌细胞内,促使其复制出感兴趣蛋白质。然而,这种方法存在一个明显的短板:那些携带质粒载体的大肠杆菌,特别是那些经过改良的实验菌株,它们的生存能力相对较弱。而且,如果没有适当的压力维持(例如抗生素),质粒会随着时间的推移逐渐丢失,这无疑给菌株的维...

【新品速递】Tobitec Ecoli CD培养基——国内首款专为mRNA药物设计

对Stbl3菌株进行评估,使用EcoliCDM01培养基培养的大肠杆菌OD600值可以达到与进口商业化CD培养基一致的生长水平。图4.24h质粒产量电泳结果图5.24h质粒产量(Stbl3)对Stbl3菌株进行评估,对比进口商业化CD培养基,和商业化的TB培养基,使用EcoliCDM01发酵培养基的24h质粒产量具有显著优势,质粒产量可达52.58μg/...

pCMV-N-Flag-BioID2 (邻近蛋白生物素标记质粒)

表达和标记:转化表达宿主细胞,如大肠杆菌(E.coli),进行蛋白表达,并利用生物素标记的标记剂标记邻近蛋白(www.e993.com)2024年11月19日。应用:用于分析蛋白质与其他生物分子(如蛋白质、RNA或DNA)之间的相互作用,例如通过近距离的免疫沉淀、共沉淀或荧光显微镜等技术。这种质粒的应用广泛,可用于分子生物学、细胞生物学和生物化学研究中,特别是在...

【陈巍学基因】视频 131:Bridge RNA 做基因编辑

如果供体质粒,和靶标质粒,发生了重组,那么这个抗卡那霉素基因就会得到启动子,并且进行表达。那么转染了这个质粒的大肠杆菌就会在有卡那霉素的培养基中活下来。然后,对活下来的细菌进行测序,就会测到重组的序列。作者先统计了与野生型供体序列不同的(新供体)序列,它们被重组的数量。

2024合成生物学竞赛常规赛队伍专题之Antibiotic-free团队丨无抗...

大肠杆菌是人们表达外源基因的首选,但常常会遇到表达效率不高和产率较低等困难。目前,质粒拷贝数已经被证明能够用于代谢途径的动态调控,来提高细胞工厂的性能。当细胞内的质粒拷贝数增加时,质粒上携带的目的基因的拷贝数也增加,其转录翻译的产物数量自然也随之增加。

一个划时代的里程碑|里程碑_新浪财经_新浪网

而mRNA的生产方式目前则更加适合大规模生产:直接将批量将病毒DNA转进质粒中,将质粒导入大肠杆菌,然后培养扩增大肠杆菌,只需要四天的培养发酵,然后就可以分解大肠杆菌,分离纯化获得DNA,然后再经过人工转录的过程,将DNA变成RNA,转录的过程只需要数小时。最后也是非常关键的技术壁垒:将mRNA加入与脂质纳米粒(LNP)结合,使其...

mRNA疫苗超全知识汇总,看这一篇就够了!

第一步:DNA质粒制备原液制备开始于质粒构建。通常使用的DNA质粒为环状质粒,质粒上含有设计好的序列模块,其中包括刺突蛋白编码。利用电流打破细胞膜,并将环状DNA质粒引入大肠杆菌。此后,大肠杆菌被储藏于含有大量营养物质的溶液中进行繁殖扩增。大肠杆菌每20分钟分裂一次,4天内可以得到数万亿DNA质粒。提取并纯化DNA质粒,...