Nature重磅综述 |关于RNA-seq,你想知道的都在这

其它方法如多聚腺苷酸位点测序(polyadenylationsitesequencing,PAS-seq)法,首先将mRNA打断为150bp左右的片段,然后使用带有oligo-dT的引物进行模板置换生成cDNA用于后续测序,其中的80%的测序序列来源于3??UTR。TAIL-seq则避免使用oligo-dT,RNA打断前,先移除rRNA,然后在转录本poly(A)尾巴连接3??接头。片段化后...

Nature:颜峻等人发现内源小RNA结合蛋白La,可全面改进先导编辑

01普林斯顿大学研究团队在Nature期刊上发表论文,发现内源小RNA结合蛋白La可提高先导编辑效率。02先导编辑是一种精准基因编辑工具,无需依赖DNA模板和DNA双链断裂,可实现所有12种单碱基的自由转换和多碱基的精准插入与删除。03为此,研究团队将La与先导编辑蛋白融合,开发了名为PE7的先导编辑器。04实验结果显示,与PEm...

PCR反应的几大要素(各组分和条件)|摩尔|扩增|引物|pcr|聚合酶|dna...

引物是PCR特异性反应的关键,PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。长序列引物(如,>50nt)或碱基经修饰的引物通常需要进行纯化,以去除非全长产物和未结合的核苷酸。对于分子克隆和突变等...

qPCR引物设计、Excel数据处理模板详解剖析

可以通过基因ID批量设计qPCR引物,方便到可以将排名第一的引物直接导出复制粘贴到引物合成订单中,问题不大,如果不放心可以大致看一下是否符合上述的引物设计原则。大多数物种包括拟南芥,水稻,小麦等,甚至只要在ensemble数据库有的物种基本上都可以通过ID设计引物。用了之后发现是真香……傻瓜式无脑操作。提交信息之后,...

qPCR原理、qPCR引物设计、Excel数据处理模板

实时荧光定量PCR(real-timequantitativepolymerasechainreaction,Real-timeqPCR),是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。通常我们会重点关注Ct值(Cyclethreshold,Ct),其含义是:每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循...

引物设计(Primer Design)

引物(primers)引物是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补(www.e993.com)2024年11月18日。引物的重要性在整个PCR体系中,引物占有十分重要的地位。PCR的特异性要求引物与靶DNA特异结合,不与其他非...

PCR 引物设计图文详解,一看就会

某些引物无效的主要原因是扩增产物单链二级结构的影响,选择扩增片段时最好避开二级结构区域。用有关软件(比如RNAstructure)可以预测估计mRNA的稳定二级结构,有助于选择模板。实验表明,待扩区域自由能(△G°)小于58.6lkJ/mol时,扩增往往不能成功。若不能避开这一区域时,用7-deaza-2'-脱氧GTP取代dGTP对扩增的成功是...

走进PCR小世界,常见问题知多少

一、模板核酸的制备:模板中含有杂蛋白质、Taq酶抑制剂;在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚;模板核酸提取过程出现问题。二、酶的质量及活性:酶失活需更换新酶,或新旧两种酶同时使用,以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。三、引物的质量与特异性:引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称,是PCR失...

RACE专题 | RACE实验总翻车?吃透原理才能应万变!

目前应用较多的为Cap-swichingRACE技术,是利用逆转录酶识别RNA的5'端帽子结构后,在产生的cDNA的3'末端加上poly(C);再使用接头引物与poly(C)互补配对完成模板转换。主要类型有3'RACE和5'RACE,3'RACE可以得到已知序列到3'末端之间的全部序列,5'RACE可以得到已知序列到5'末端之间的全部序列。

2024年郑州大学硕士研究生招生考试706临床医学综合考试大纲已发布

2.转录的模板和酶:转录模板:结构基因,不对称转录,模板链,编码链。RNA聚合酶:原核生物的RNA聚合酶(核心酶、全酶),真核生物的RNA聚合酶(I、II、III)。模板与酶的辨认结合。3.转录过程:原核生物转录过程:转录起始、延长(转录空泡)、终止(依赖Rho、非依赖Rho的转录终止)。真核生物转录过程:转录起始(...